阿魏酸抑制aβ诱导的pc12细胞tau蛋过度磷酸化的机制研究

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3、IJlNIIIIIHIIImllllIIRfY2623594目的：阿尔茨海默病(Alzheimer’SDisease，AD)是一种与年龄相关以进行性学习、记忆及其它认知障碍为主要表现的中枢神经系统变性疾病。随着人口老龄化进程的加快，老年性痴呆已成为一个显著影响人类健康的突出问题

4、。因此，阐明AD发病详细机理，积极开创新药，特别是从中医中药中发掘出有效单体或有效成份是我国药物研究者及医护人员的重要使命。其中AB沉积与神经纤维的缠结(NFT)为AD最重要的两个病理表现。研究表明神经纤维缠结的数量与痴呆程度成正比，tau蛋白过度磷酸化是形成NF的主要成分，是其发病机制中的一个核心环节，如何抑$0tau蛋白的过度磷酸化被认为是治疗AD的突破点，以tau蛋白过度磷酸化为靶点治疗神经系统退行性疾病的药物已越来越受到重视。阿魏酸是从当归、川芎等中药植物提取的有效单体，可以透过血脑屏障(BBB)

5、“1。关于阿魏酸的药理作用已有大量报道，阿魏酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等作用；阿魏酸对于小鼠脑缺血再灌注损伤模型可显著减少脑组织LDH活性、MDA含量，显著提高SOD活性乜1；对于脑缺血再灌注大鼠，复方阿魏酸可以减少脑组织内皮素一1、MDA及乳酸的产生，提高脑组织CGRP、ATP及Na+-K+-ATP酶活性口3。本实验研究以AB卜42诱导PCI2细胞tau蛋白过度磷酸化的AD细胞模型，研究阿魏酸对AB卜42诱导PCI2细胞tau蛋白过度磷酸化的保护作用及保护机制。方法：先用AB1-42作用于PCI2细胞，

6、建立tau蛋白过度磷酸化的AD细胞模型，通过MTT法、LDH法验证阿魏酸对AD细胞模型是否有保护作用；通过流式细胞术检测细胞凋亡率以及检测caspase3来分析阿魏酸是否通过抗凋亡起到保护作用；用westernb】oting法检测p-Aktser473Akt、p-GSK3Bset9、GSK3B、p-tau5”2、p-tau8””这几个蛋白表达的变化分析阿魏酸是否通过P—13K—AKT-GSK-313这条信号通路调节tau蛋白过度磷酸化的；最后通过ROS、MDA测定验证阿魏酸是否具有抗氧化作用?结果：1，阿

7、魏酸对PCI2细胞的保护作用：10PM、IOOpM、500州阿魏酸预保护24h，20PMAB卜42再作用12h，MTT法证明细胞存活率上调(尸(0．05)，LDH释放率降低(P(O．05)，ROS、MDA释放减少(P(0．01)。2．阿魏酸能减轻AB卜42导致的PCI2细胞AKT(set473)活化的抑制与GSK-3B(ser9)失活的抑制(P(0．05)，因此我们推测阿魏酸通过调节P13K-AKT—GSK一3B信号通路，增强AKT的磷酸化，从而抑制GSK一3B的活性，有效的降低tau蛋白的过度磷酸化(P

8、(O．01)3．阿魏酸抗凋亡作用：通过Annexin—V—FITC流式细胞术发现阿魏酸可明显抑制凋亡，降低caspase3活性及蛋白表达(尸(0．05)。结论：阿魏酸可明显降低A01-42对PCI2细胞的损伤，并通过P13K—AKT—GSK一3B这条信号通路减少AB1-42引起PCI2细胞tau蛋白的过度磷酸化，并可通过抗氧化和抗凋亡作用协同起到保护作用。关键词：阿尔茨海默病；tau蛋白；阿魏酸；P13K_AKT；GSK一3BIIThestudyofinhibitionofferulicacidonA13

9、inducedtauproteinhyperphosphorylationPCI2celIsanditspossiblemechanismsSpeciaIty：InternaIofTraditionalOhineseMedicineAuthor：SuRuyuTutor：Wang0iAbstractObjectIve：Thisstudvaimedtoex锄inetheprotectiveeffectsofFerulicacid(