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1、五味中药对灵芝菌液体发酵过程的影响摘要观察中药对灵芝菌液体发酵过程中生物量和胞外多糖的影响。麻黄、莱蔗子、金银花和连翘4味中药对生物量有明显促进作用。黄岑对灵芝生长有抑制作用。关锐词中药,灵芝,发酵,多糖灵芝(Ganodermalucidum)为担子菌纲,多孔菌科,灵芝菌属真菌,自古以来就是我国名贵药用真菌。现代医学研究证明,灵芝中所含的灵芝多糖和灵芝酸类物质能提高肌体免疫力,延缓衰老,对老年慢性支气管炎有明显的疗效。为了定向强化灵芝的药效,作者将中药添加到灵芝液体培养基中,观察中药成分对灵芝菌丝体生长及代谢产物胞外多糖的影响。1材料和方法1.1材料灵芝菌:研究室保存的菌种。种子培基养:葡
2、萄糖209/L,玉米粉109/L,鼓皮粉59/Lo基础培养基:葡萄糖409/L,蛋白陈49/L,Mg-5040·759/L,K姚pO41·59/L,几、10mg/LO中药材:购自无锡山禾药业集团。无水NaZs氏,HZS()4市售分析纯。1.2方法1.2.1中药的粉碎称取中药材,粉碎,过40目筛。药粉用于灵芝液体培养。1.2.2接种培养将药粉按一定比例加入250mL三角瓶中,加入基础培养基溶解。121℃灭菌30min。冷却后接入灵芝液体菌种,接种量10%。摇瓶条件:三角瓶250mL,装液量70mL,30℃,转速150叮min,培养时间7d。1.2.3生物量的计算发酵液经离心,沉淀,用水洗涤3
3、次,再次离心,沉淀,在105OC烘干至恒重,称得生物量。1.2.4胞外多糖的计算将发酵液离心所得上清液合并,减压浓缩到发酵液体积的2/5一1/2,加95%乙醇到乙醇含量为30%,4oC静置24h。离心,弃去沉淀,向上清液中再加95%乙醇到乙醇含量达到60%,4℃静置24h。离心,沉淀用60%乙醇水溶液分散,再离心,弃去上清液,以此法清洗沉淀,去除沉淀中夹带的少量单糖和低聚糖。沉淀洗2次。再次离心后的沉淀用蒸馏水溶解并定容到25mL,然后用浓玩s氏一苯酚法测多糖含量。2结果2.1中药对生物t的影响2.1.1不同品种中药对灵芝菌生物量影响的比较培养基中分别加入5味不同的中药,接种培养后所得生物
4、量如表1,其中的对照样为在不添加中药的基础培养基培养的结果,其他条件相同。从表1可见,加黄等、连翘和金银花的样品生物量比对照样低得多,说明这些中药对灵芝菌的生长可能存在抑制作用;麻黄和莱旅子样品的生物量.比对照样高,说明这些中药对灵芝菌的生长可能有一定的促进作用。2.1.2中药用量的影响在基础培养基相同的条件下,改变中药用量,灵芝的生物量也受到影响。结果如图1第一作者:硕士研究生。收稿时间:2003一12一05.改回时间:2004一03一09(46)(I,H)所示。表1中药对生物t的影响中药名称加药量生物量用量下不会抑制灵芝生长,而在0.6259/mL以上则会显著抑制灵芝生长。2.2对胞外
5、多糖的影响对生物量不会产生大的抑制作用的4味中药对灵芝菌在液体培养下产生胞外多糖旱的影响结果见表2。表2中药对胞外多枯的影响中药用量胞外多搪中药名称,于,,工R内J内、……内JLU弓JJ门‘,l‘U..立..1丹j八乙0000000朋00对照样黄苹(R.&“tel纽~)金银花(月“肠nice。)连翘(介“之。Fo移皿h二)麻黄(E琳耐栩:动1ca腼Pf)莱旅子(反~尺“刘巨爪)454《)对照样0318金银花(月。:肠nicerae)100236连翘(开uct“:Forsy之hzae)100229麻黄(万助己己msinlcas勿pf)2001451莱放子(&menRaPhan￡)100117
6、7从表2可见,金银花和连翘对灵芝胞外多糖分泌量没有明显的影响,而麻黄和莱旅子能成倍增加胞外多糖分泌量。0n‘"山·圳妙州娜2O旬6O中药用801001201引)量29·L一,3讨论叨30斗金银花一连翘.山·妙圳浑好01,..…,}406()801001201钓l印l8()20()2202绷】中药用量lg·L-,图1中药用量对灵芝生物量的影响从图1可见,随着5味中药用量的增加,生物量均下降,表现为一定程度的抑制作用。但是,加麻黄、莱兼子的样品虽然有随中药量增加生物量下降的趋势,但生物量的绝对值却比不加中药的对照样高。因此,这2味中药对灵芝菌的生长可能同时存在促进因子和抑制因子,促进因子使生物
7、量比对照样的大,而中药用量的增加,使抑制因子的作用增加,所以生物量下降。加黄芬的发酵液生物量比对照样刁、得多,说明抑制作用较强。连翘的用量达到1009/L时有很强的抑制作用,在459/L以下的用量没有表现出强的抑制作用。金银花在31岁L的研究表明,麻黄和莱服子对灵芝菌生长有促进作用,还能促进胞外多糖的分泌,这将加强灵芝的疗效。连翘和金银花对灵芝多糖没有大的影响,但是它们在较小用量下对生物量有明显促进作用,这也将有利于灵芝
