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1、中药提取液对灵芝深层发酵的影响关键词:中药,发酵,灵芝我国中医药历史悠久,中药资源丰富,为保证广大人们的身体健康起到巨大作用。但近几十年来,我国在中药现代化方面进展缓慢,其中原因之一就是中药加工技术陈旧[1],近来有学者提出了中药发酵制药技术[1,2]。药用真菌是中药的组成部分,它们中的许多种类都能以液体发酵进行生产[3],以适当的中药为培养基或在培养基中添加适量的中药,利用它们强大的分解转化能力,不仅可对中药中的纤维、糖类和蛋白等物质加以利用,而且在代谢过程中可能对中药中的一些成分进行转化,从而提高中药活性成分在复合制剂中的比例及效价;
2、另外中药中的某些成分亦能促进药用真菌的生长或活性产物的产生,这样可生产出包含多种活性成分且药效较简单组方配伍更佳的新型发酵制剂,为此,本实验室开展了利用灵芝等药用真菌对中药进行发酵的研究,首先对适合灵芝发酵的中药进行了筛选。本文报道了部分中药对灵芝在液体培养中生长(生物量)及代谢产物(胞外多糖)的影响,为利用灵芝进行中药发酵提供基础。1材料和方法1.1材料11111菌种:灵芝(Ganodermalucidum),由江南大学生物工程学院生物资源研究室筛选保存。11112培养基:种子培养基:每升含葡萄糖20g,玉米粉10g,麸皮粉5g,豆饼粉
3、5g。发酵基础培养基:每升含葡萄糖40g,蛋白胨4g,MgSO40175g,KH2PO4115g,VB10101g,pH615。11113中药材:黄芪(Astragalusmembranaceus)、薏苡仁(Coixlachryma-jobi)、枸杞子(Lyciumbarbarum)、当归(Angelicasinensis)、玄参(Scrophularianingpoensis)、山药(Dioscoreaopposita)、党参(Codonopsispilosula)、牛膝(Achyranthesbidentata)和石斛(Dendrob
4、iumnobile)均购自江苏无锡山禾药业集团。芦荟(Aloevera)为鲜叶晒干自制。112中药水提液的制备称取中药材(已切片),加6倍量水浸泡1h,用电炉煎熬,调整适当的加热温度,使保持温和的沸腾状态。煮沸30min,倒出药汁,补加适量冷水于药渣中,再煮沸20min,倒出药汁。合并药汁(控制至适当体积),过滤,以3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylicacid,DNS)法[4]测定药汁中还原糖含量,药汁用于灵芝液体培养。113中药醇提液的制备称取一定量中药材,加10倍量70%乙醇浸提48h,过滤,减压蒸去乙醇,再
5、加水至适当体积,静置24h,过滤,以DNS法测定药汁中还原糖含量[4],药汁用于灵芝液体培养。114接种培养将72mL药汁倒入250mL三角瓶中,加入发酵基础培养基(控制各试验样品与对照样品中还原糖浓度相同),每个样品设3个重复。121e灭菌30min。冷却后接入灵芝液体种,接种量10%。摇瓶条件:三角瓶250mL,装液量80mL,30e150rPmin培养7d。115生物量计算将发酵液离心(4000rPmin,10min),沉淀用水洗两次,再离心,沉淀在105e烘干至恒重,称重得生物量。116胞外多糖计算发酵液经离心所得的上清液合并,减
6、压浓缩到发酵液体积的2P5~3P5,加95%酒精到乙醇含量为30%,在冰箱中静置24h。离心,弃去沉淀,上清液再加95%乙醇到乙醇含量达到60%,在冰箱中静置24h。离心,沉淀用蒸馏水溶解并定容到25mL,用苯酚-硫酸法测多糖含量[4]。2结果2.1中药水提液对灵芝发酵的影响取黄芪等10味中药各15g,制成水提液后,研究其对灵芝液体发酵生物量及胞外多糖的影响,结果见表1。其中对照为在不添加中药的基础培养基中发酵的结果,其它条件相同。由表1可见,在每升培养基为18715g生药量的剂量下,除黄芪外,薏苡仁、枸杞子、当归、玄参、山药、党参、牛膝
7、、石斛和芦荟的水提液均能促进灵芝的生长(生物量增加),以牛膝、山药效果显著,生物量分别为对照的2135和2112倍;在胞外多糖方面,加入中药水提液的发酵样比对照高2146~9122倍,抑制灵芝生长的黄芪水提样亦比对照高313倍,中药中某些成分虽可促进灵芝胞外多糖的分泌,但这一结果更可能是中药水提液中本身中药多糖的含量高。为排除中药本身多糖的干扰,我们研究了中药醇提液对灵芝液体发酵的影响。表1中药水提液对灵芝生物量和胞外多糖的影响试样生物量P(gPL)胞外多糖P(mgPL)试样生物量P(gPL)胞外多糖P(mgPL)试样生物量P(gPL)胞
8、外多糖P(mgPL)对照1210626111当归19178172811牛膝28133183212黄芪714386610玄参21195108412石斛16151103919薏苡仁17133642
