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时间:2017-08-21
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1、彝药大火草花中槲皮素的色谱定性研究 摘要:目的建立大火草花中槲皮素的提取方法,对大火草花中槲皮素进行薄层和高效液相方法鉴别。方法采用薄层色谱法对大火草花中槲皮素进行分离鉴别,并用高效液相色谱法加以确定。结果大火草花中含槲皮素成分,可用薄层色谱鉴别槲皮素。结论薄层色谱法简便、准确,高效液相色谱法可为槲皮素含量的测定奠定基础。 关键词:大火草花;槲皮素;薄层色谱法;高效液相色谱法. 大火草记载于《云南省中药材标准》2005版第六册彝族药(Ⅲ)。为菊科植物钩苞大丁草GerberadelavayiFrance的干燥全草。又名钩苞大丁草、小一支箭、火草、白地紫苑等,是一种民间常用中
2、药。具有清热利湿,消积杀虫等作用。临床主要用于治疗痢疾,胃痛,消化不良,蛔虫症等。槲皮素,又名栎精,槲皮黄素,可作为药品,具有较好的祛痰、止咳作用,并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉,增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。此外,邢博士关于《利用槲皮素阻断雄激素对激素依赖型的人类前列腺癌细胞的发现》一文认为,槲皮素可以阻断雄激素对激素依赖型的人类前列腺癌细胞的作用。本文采用薄层色谱法和高效液相色谱法,对大火草花中有效成分槲皮素进行了研究,对其质量控制有一定的意义。 1仪器和材料
3、. 大火草(玉溪市澄江县帽天山自采);槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100081-201408含量以991%计);电子天平(赛多利斯BP211D-OCE,赛多利斯BSA224S-CW);高效液相色谱仪(安捷伦1260);超声清洗仪(Branson5800);硅胶G薄层色谱板(MERCKHX117107);可见-紫外分光光度计(安捷伦Cary60);薄层色谱板成像仪(BiostepCabuvis);数显控温水浴锅(XMT-DA);电热加热板(EH20A-plus);水处理器(Micraoperatormanual);自动显色喷射器(SPU-1);玻璃仪器均为天津玻璃仪
4、器厂生产;分析纯试剂均为四川西陇化工有限公司生产,色谱纯甲醇为德国默克股份有限公司生产。 2方法与结果. 2.1薄层鉴别. 2.1.1供试品溶液的制备取供试品粉末01g,加70%乙醇30mL超声30min,取滤液蒸干,加水10mL使溶解,用石油醚(30~60℃)萃取,弃去石油醚液,水溶液加3mL稀盐酸回流1小时,用冷水立即冷凝,用乙酸乙酯萃取3次,每次10mL,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,加1mL乙酸乙酯溶解,作为供试品溶液。 2.1.2对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1mL含1mg槲皮素的溶液,作为对照品溶液。 2.1.3色谱方法照薄层色谱
5、法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验,分别吸取上诉两种溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:8:1)为展开剂展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,在日光和紫外(365nm)下检视。 2.1.4结果供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点和荧光斑点。TLC色谱图见图1. 2.2HPLC测定. 2.2.1HPLC鉴别吸收波长的确定取槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1mL含5ug槲皮素的溶液,作为供试品溶液,以甲醇为空白溶液,取供试品溶液,在200~800nm波长范围内进行扫描,结果在375nm和255nm处有最大吸收。37
6、5nm波长处峰形状圆滑对称,故选择375nm为HPLC鉴别吸收波长。见图2、图3: 2.2.2色谱条件色谱柱为ZORBAXExtend-C18(46mm×250mm,5um);流动相为甲醇-02%磷酸(45:55);流速10mL/min.检测波长375nm,柱温30℃。进样量10uL.理论塔板数按槲皮素计算,应不低于6000.在此色谱条件下,槲皮素对照品和大火草火药材的HPLC图谱见图4、图5. 2.2.3对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1mL含50ug槲皮素的溶液,作为对照品溶液。 2.2.4供试品溶液的制备取本品粉末01g,精密称定,精密加甲醇-2
7、5%盐酸(4:1)25mL,称重,回流提取1h,冷却,补足重量,过滤,精密吸取续滤液5mL~25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(045um)滤过,取续滤液,即得供试品溶液。 2.2.5结果供试品色谱在与槲皮素对照品色谱相同的保留时间上有相同峰。见图4、图5. 3讨论. 3.1薄层鉴别提取方法比较本实验尝试了多种提取方法:①以甲醇为溶剂回流提取60min,滤过,滤液浓缩。②以乙醇为溶剂超声处理60min,滤过,滤液浓
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