融合基因筛查SOP.doc

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1、ADICONClinicalLaboratories,Inc.艾迪康医学检验中心StandardOperatingProcedure标准操作程序ADNo.编号:SOP-ET219Version版本:1。0Page页码12of5Writtenby编制人：钟维君Date日期:2011-5-13EffectiveDate生效日期:DistributionScope发放范围：研发部特检实验室Reviewedby审核者：Approvedby批准人：Refertoaddendumfordocumentuserapprovalandannualreviewinformation文件使用批准

2、和年度审核信息请参考附录31项融合基因筛查标准操作流程SOPonFusionGenesofLeukemia检测信息项目名称中文31项融合基因筛查标准操作程序英文SOPonFusionGenesofLeukemia检测方法多重PCR反应1.原理及应用本检测项目利用商品化试剂盒，采用多重PCR方法筛查白血病常见的31种融合基因，可以准确、快速而且可靠地确定白血病的分子类型，提供白血病诊断和治疗的依据。2.样本要求标准类型EDTA抗凝骨髓/全血2ml收集容器EDTA抗凝管（不含其它物质）运输容器带塑胶盖试管运输要求0-10˚C冷藏运输小于2天稳定性及储藏要求室温短暂冷藏温度（2-8

3、˚C）3天-20°C三个月（提取出RNA）-70°C一年（提取出RNAcDNA）时间要求无样本拒收及采取措施拒绝重度溶血、严重凝血样本、肝素抗凝影响／干扰因素溶血、凝血、脂血、骨髓间质较多或肝素抗凝标本可能会严重影响实验结果其它条件应避免反复冻融标本ADICONClinicalLaboratories,Inc.艾迪康医学检验中心StandardOperatingProcedure标准操作程序ADNo.编号:SOP-ET219Version版本:1。0Page页码12of53.试剂3.1订购试剂及试剂盒试剂名称厂家货号试剂型号及规格储藏及稳定性准备工作逆转录试剂盒TOYOBO逆

4、转录酶-20℃保存；其他4℃保存逆转录酶4℃备用，其他室温平衡15分钟KODPCR试剂盒TOYOBO酶-20℃保存；其他4℃保存酶4℃备用；其他室温平衡15分钟ThunerbirdprobeQPCRmixTOYOBO-20℃保存；室温平衡30分钟TAKARARTAQPCR试剂盒TAKARA酶-20℃保存；其他4℃保存酶4℃备用；其他室温平衡15分钟Dutp上海生工2mM，4℃保存室温平衡15分钟UNG酶上海闪晶-20℃保存；4℃备用TrizolReagentinvitrigen200ml/瓶4℃保存4℃备用100bpDNAladderTAKARA4℃保存4℃备用GELred核

5、酸染料万飞生物RTRT3.2自备试剂红细胞裂解液；PBS（？）氯仿，异丙醇，75%乙醇，无水乙醇，RNase-free水3.3引物配置3.3.1储存浓度引物（100umol/L）的配制将Takara订购的32条特异性逆转录引物及多重PCR内外侧引物12000rpm/分钟离心1分钟，超净台静默状态下操作，跟据说明书给出的质量nmol数*10ul加入DEPC-H2O，混匀离心，-20℃保存。ADICONClinicalLaboratories,Inc.艾迪康医学检验中心StandardOperatingProcedure标准操作程序ADNo.编号:SOP-ET219Version

6、版本:1。0Page页码12of53.3.2工作浓度引物的配制3.3.2.132条特异性逆转录引物将储存浓度的32条特异性逆转录引物各取5ul，等量混合，混匀，6000rpm/分钟离心15s，分装，-20℃保存。3.3.2.2多重PCR初筛引物按照《31种融合基因分组表》将融合基因引物分成8组，每组共2管，分内外侧。每管按表中的引物序列号加入储存浓度的多重PCR引物各3ul，内参引物各1.5ul，补水到50ul，工作浓度为6umol/L，混匀离心，分装。-20℃保存。外侧初筛引物配制表组别筛查引物编号内参引物编号加水量S1111，121，131，141，151，161，171

7、，181011，02123ulS2141，151，231，241，251，261，271，281011，02123ulS3311，011，321，331，341，351，36102127.5ulS4411，421，431，441，461，471011，02129ulS5141，151，531，541，551，561，571011，02126ulS6631，641，651011，02138ulS7711，721，731，741，751011，02132ulS8811，841，851，861，871011，