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《羊栖菜多糖(SPFS-B1)原子力显微镜观察.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、羊栖菜多糖(SPFS-B1)®子力显微镜观察on(1•哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心龙江哈尔滨150076;□2国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，黑龙江哈an尔滨150076)□□摘要：将提取的羊栖菜多糖Sevage法除蛋白、Hn2OD2脱色后得到羊栖菜多糖半纯品，依次通过DEAE-52、SephadexG-200柱层析分离纯化后得到SFPS-B1o用原子力显微镜(AFM閃羊栖菜多精SPFS-B1)的微观结构进行观察。羊栖菜多糖(SPFS-B1)分子的稀溶液铺展在新鲜解理Ninn2+n处理的云母片上，经干燥，乙醇
2、固定后，获得稳定、重复的图像。羊栖菜多糖(SPFS-B1)分子具有高度分枝的结构，并且糖链间形成环状、柱状或近似于螺旋状的结构。羊栖菜多糖(SPFS-B1)链呈多股紧密的螺旋结构，这种现象可能与该多糖中分子间的VanderWaals相互作用以及糖链间氢键缔合有关。口关键词：原子力显微镜；羊栖菜多糖；螺旋结构口中图分类号：R915;R917文献标识码：A文章编号:1673-2197(2008)10-0012-02生命中的螺旋结构现象可能具有普遍性，除蛋白质、核酸、脂类等生物分子都存在螺旋结构外[1,2],多糖的螺旋状结构也有报道
3、[3,4],但羊栖菜多糖是否也存在螺旋状结构至今尚未见报道。由于多糖相对分子质量较大，结构复杂，自身常存在结构缺陷，从而难以得到良好的晶形，原子力显微镜(□AtomicForceMicroscope,AFM)的出现，使得对多糖这样的生物大分子表面形貌的观察成为可能[5,6]□我们用AFM直接观察羊栖菜多糖的微观结构，获得了较清晰、重复性好的分子链结构影像，这为深入研究生物组织的微观结构和揭示生命规律，提供了重要依据。口1材料与方法口1.1材料与仪器口DEAE-52(Pharmacia),SephadexG-200(Pharma
4、cia),羊栖菜购自哈尔滨市药材公司，并经哈尔滨师范大学生物系鉴定。口Adventurer万分之一电子天平(OHAUS公司)，旋涡混合器(美国BohemiaNY公司)，AJ-III型原子力显微镜(爱建纳米b□1.2羊栖菜多糖的分离纯化口取一定量的羊栖菜多糖配制成一定质量浓度的多糖水溶液,加入氯仿、正丁醇(5:1),剧烈震荡20min,混匀，离心(10min,3000r卜除去水相与有机相间的蛋白，水相仍按照此方法反复除蛋白6次后，氨水调节pH值8~9,加入10%左右的日口20口2放入冰箱保鲜层过夜，流水透析72h,蒸憎水透析24
5、h，减压浓缩后，加入4倍体积的无水乙醇,充分震摇于49静置24h,弃上清，沉淀以无水乙丙酮洗涤,备用。1.3DEAE-52纤维素柱层析口所得羊栖菜多糖进行DEAE-52(2.6x55cm)柱层析，用0.05mol/LNaCI洗脱，自动部分收集器收集洗脱液，苯酚硫酸法隔管检测，流水透析至无CI■后，冷冻干燥得SFPS-Bo□1.4SephadexG-200凝胶过滤柱层析口取SFPS-B分别溶于少量水中，进行SephadexG-200(1.6x80cm)柱层析，以0.02mol/L的NaCI洗脱，自动部分收集器收集洗脱液，苯酚硫酸
6、法隔管检测，合并单一峰,分别得到SPFS-B1.SFPS-B2部分。将SFPS-B1.SFPS-B2流水透析至无CI■后冷冻干燥。得洗脱部分SFPS-B1,本研究对SFPS-B1进行AFM观察。口1.5AFM制样口把SFPS-B1(1mg/mL)溶于去离子蒸憎水中，冷至室温，再稀释，加热溶解，冷却，直至样品浓度为0.01mg/mLo通过加热使样品溶解完全且减少大聚集体的存在，取5pL多糖溶液(0.01mg/mL)滴在新鲜解理的云母片上，空气中干燥10min,大量水冲洗去没有吸附的残留物,再滴加无水乙庠固定，为防止多糖从云母表面
7、脱附，样片干燥后即可进行AFM测量。口2实验结果口2.1栖菜多糖DEAE-52D纤维素柱层析如图1所示，样品洗脱峰为单一对称峰，流水透析至无CI-后，冷冻干燥得SFPS-Bo□图1NaCI洗脱曲线2.2羊栖菜多糖SPFS-BSephadexG-200凝胶过滤柱层析口如图2所示，洗脱组分为2个，将SFPS-B1、SFPS-B2流水透析至无CI-后冷冻干燥。取洗脱部分SFPS-B1,本研究对SFPS-B1进行AFM观察。口图2SFPS-BSephadexG200凝胶色谱纯化2.3羊栖菜多糖SPFS-B1的原子力显微镜（AFM）图口
8、图3、图4是SFPS-B1在云母片上的AFM图像，扫描范围分别为44pmx44pm，扫描频率1.02Hz，从图中可以看出多糖分子链出现近似棒状螺旋结构，糖链的密度依赖于其初始浓度及其沉积到云母片表面的量；图像的对比度依赖于针尖上的作用力，作用力太大易损坏糖链，而太小则对比度差
