猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达.pdf

《猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、广西农业科学2010，41(6)：598-601GuallgxiAgriculturalSciences猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达黄百花，刘文娟，李志勇，谭春萍，周松峰，谭颖翌，罗佳，陆芹章+(广西大学动物科学技术学院，南宁530005)摘要：根撤,enBarrk已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T．Plll)f0】A基因序列(A脚78)设计1对引物，从猪源D型'PPm中扩增出toxA基因片段(3858bp)。再根据toxA基因序列设计3对引物，分别扩增出ZQ(1084bp)、ZH(1092bp)、HM(9

2、06bp)3个分段基因，将其克隆至原核表达载体pET32a，转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS—PAGE和West—emblotting检测分析，发r-觅ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在，大小分别为75、50kDa，ZH基因不表达。动物试验结果表明，HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性，而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELlSA的方法检测抗毒素的阳性猪血清，结果表明，HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。关键词：猪D型产毒素多杀巴氏杆菌；毒素基因；分段；原核

3、表达中图分类号：$858．28文献标识码：A文章编号：1002—8161(2010)06-0598--04Prokaryoticexpressionofsub-toxAgenefortoxigenicPasteurellaMultocidatoxinofswineserotypeDHUANGBai-hua，LIUWen-juan，LIZhi-yong，TANChun—ping，ZHOUSong-feng，TANYing—yi，LUOJia，LUQin-zhang’(CoHegeofAnimalScienceandTechno

4、logy，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：Apairofprimersw鹪designedusingtoxAgenesequenceoftoxigenicPasteurellamuhocidaf胛m)(Gen—Bank)，anda3858bpfragmentWaSamplifiedfromtoxigenicPaSteumllamujtocidawithswineserotypeDusingPCR．WiththetemplateoftoxAgenesequence，

5、threepairsofprimersweredesignedwhichamplified1084bp(ZQ)，1092bp(ZH)and906bp(HM)genefragments．neacquiredPCRproductswelt．einsertedintoprokaryoficexpressionpET32a(+)，andtrans-formedintoEc格BL21(DE3)‘∞expressioninducedbyIPTG．TheexpressedrecombinantproteinWaSdetectedusing

6、SDS-PAGEandwesternblotting．ItWaSfoundthattheexpressionproductsofZQandHMexistedasinclusionbodywith75and50kDa．whileZHgavenoexpression．MousetestresultsshowedthatHMrecombinantproteinhadgoodimmuno-logicalreactionandbiologicalactivities，whileZQproteinWasfoundwithoutanyac

7、tivity．neantitoxicpositive8erllnlofswinewagdetectedbyindirectELISAmethod．andthespecificityoftherecombinantproteinHMWaft,foundtobehigherthanthatofnegativeprotein．ThisstudyprovidesusefuldataforfurtheruseofthePasteurellamtIJtocidatoxin(PMT)．Keywords：toxigenicPasteurel

8、lamultocidaofswineserotypeD：sub-toxAgene；fragment；prokaryoticexpression．产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxingenicPasteurellamuhocida，m1)是引起猪进行性萎缩性鼻炎(Pro．gressiveatro