广西德保猪抵抗素基因的克隆与分析.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2014，45(7)：1276—1280ISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．7．1276广西德保猪抵抗素基因的克隆与分析廖玲玲1，李俊2，杨厚德1，刘庆友2，谢炳坤”，崔奎青2+(1广西畜牧研究所／广西家畜遗传改良重点实验室，南宁530001；2广西大学动物繁殖研究所／亚热带生物资源保护利用国家重点实验室，南宁530005)摘要：【目的】克隆广西德保猪抵抗素(Resistin，RENT)基因并进行系统生物信息学分析，阐明德

2、保猪脂肪细胞分化与脂肪生成的分子机制。【方法】根据NCBI已公布的猪RENT基因序列(NM213783．2)设计特异性引物，以从德保猪血液中提取的总RNA为模板，PCR扩增REN磋因序列，T—A克隆至pEASY—T1载体后进行测序分析，并将所得测序结果用BLAST程序、MEGA5．0软件、EXPASYJ报务器、SMART程序、SignlP程序、Soflberry服务器和DNASTAR软件进行生物信息学分析。【结果】扩增获得468bp的RENT基因序列片段，包含全长的德保猪mCNr基因编码区和部分非编码区序列。多重序列比较分析结果显示，德保猪mCNr基因编码区核酸序列与猪

3、、牛、山羊、绵羊、人、兔、猕猴和豚鼠的同源性分别为100．o％、85．5％、85．5％、84．5％、81．2％、80．3％、80．o％和77．3％。德保猪RENT蛋白结构预测结果显示，其理论分子质量11．69ku，等电点7．82，为弱碱性蛋白；N一末端存在信号肽，定位于胞质外，仅具有1个低复杂度结构域，包含1个仪一螺旋、8个p一折叠、7个T一转角及两个无规则卷曲。【结论】mSNr#g因在德保猪中呈高度保守特征，是其脂肪细胞分化中的重要调控基因。关键词：德保猪；REⅣ了基因；克隆；基因功能分析；同源性；蛋白结构预测中图分类号：$828．89文献标志码：A文章编号：2095

4、—1191(2014)07—1276—05CloningandanalysisofResistingeneinGuangxiDebaopigLIAOLing-ling1，LIJun2，YANGHou—del，LIUQing—you2，XIEBing—kun”．CUIKui—qin92+(*GuangxiKeyLaboratoryofLivestockGenetichnprovement，GuangxiInstituteofAnimalSciences，Nanning530001，China；2StateKeyLaboratoryfbrConservationandUti

5、lizationofSubtropicalAgro-bioresourees，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：【Objective】CloningandbioM'ommticsanalysisofResistingeneinDebaopigwereconductedtoex—ploremolecularmechanismofadipoeytedifferentiationandlipogenesisofDebaopig．【MethodlWiththereleasedpigREⅣ丁genesequence(NM

6、一213783．2)asatemplate，apairofprimerswasdesigned．TheREⅣ丁genewasamplifiedbyRT—PeRfromisolatedtotalRNAofDebaopigblood．TheREⅣTgenewasinsertedintopEASY—T1vectorbyT—Aclonemethod，andwassequenced．AnditsbiointbrmatiesanalysiswasperiotilledusingBLASTprogram，MEGA5．0sofl—ware，EXPASYserver，SMARTprogr

7、am，SignIPprogram，SoflbewyserverandDNAStarprogram．【Result】A468bpRENTgenefragmentofDebaopigwasclonedandsequenced．Thesequencemuhi——alignedresultsshowedthatDebaopigRENTgeneshared100．0％，85．5％，85．5％，84．5％，81．2％，80．3％，80．0％and77．3％homologvwiththatofSusSCl'01Cj，Bostaurus，Caprahir