Dlk—1蛋白在结肠癌中表达及其临床意义.doc

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1、Dlk—1蛋白在结肠癌中表达及其临床意义［摘要］目的探讨Dlk-l蛋白在结肠癌中的表达及临床意义。方法收集我院53例结肠癌术后病理切片，应用免疫组化的方法检测Dlk-l蛋白在结肠癌组织及19例癌旁正常组织中的表达情况。结果Dlk-l蛋白在结肠癌组的表达（54.72%）与癌旁正常组织中的表达（0）差异有高度统计学意义（P5cm、病理组织检查为正常的癌旁组织为对照组。1.2方法石蜡切片采用柠檬酸抗漂修复缓冲液高温抗原修复法，应用SP免疫组织化学法染色，严格按照试剂盒上的步骤进行，同时用已知阳性片比照。采取PBS液代替一

2、抗作空白对照，并与癌旁组织进行对照。1.3结果判定Dlk-l蛋白阳性定位于细胞质或细胞膜，呈明显棕黄色反应即为阳性。每个标本切片选取5个高倍视野（400倍），计算出各个视野中阳性细胞数的平均百分比数作为该切片的阳性细胞百分比进行计分，计算阳性细胞平均百分比。染色评判标准按阳性细胞百分比将染色结果分为3级：阳性细胞百分比小于10%为阴性（-）,10%〜50%为阳性（+）,>50%为强阳性（++）,阳性和强阳性标本全部统计为阳性组进行统计学处理。1.4统计学方法采用SPSS12.0软件进行统计分析，组间计数资料进行用x

3、2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果1.1免疫组化染色结果Dlk-1蛋白在结肠癌组织标本中表现为细胞膜或细胞质内深浅不一、粗细不等的颗粒状、棕褐色染色，细胞核未见明显着色，阳性细胞多呈弥漫性或局灶性分布。1.2Dlk-1蛋白在结肠癌组织和正常组织中的表达情况Dlk-1蛋白在19例癌旁正常组织中均无表达；在53例结肠癌组织中，有29例(54.72%)Dlk-1蛋白阳性表达。经列联表x2检验分析得出：结肠癌组织与癌旁正常组织之间的Dlk-1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)o1.3Dlk-1蛋白表达与

4、结肠癌病理分级及分期的关系Dlk-1蛋白在结肠癌组织学分级中，高分化、中分化、低分化级中的阳性表达率分别为35.00%、44.44%、70.83%,随着分化程度的降低，其阳性表达率也明显升高；Dlk-1蛋白在结肠癌TNM临床分期中，I、II、III期中的阳性表达率分别为33.33%.44.44%、62.07%,其阳性率随着临床分期的增高而升高。3讨论现在很多文献已证实肿瘤实际上是一群异质细胞群体，只有一小部分细胞具有自我更新的能力。肿瘤干细胞或起始细胞最先在血液恶性肿瘤中发现，后来在乳腺、大脑、前列腺、肝脏、肺、黑

5、色素瘤、胰腺和大肠肿瘤等多种实质肿瘤中也能检测到肿瘤干细胞［3-5］o而且大量研究发现干细胞有特定的分子标记，比如CD133在包括结肠癌等多种肿瘤干细胞中表达，但是正常组织干细胞和肿瘤干细胞的关系在多种肿瘤中都不是很清楚［6-7］oDlk-1蛋白是一种1型跨膜蛋白，包含6个EGF样序列胞外结构域，一个单一的跨膜结构域和一小段胞内尾巴。其细胞外结构域与Delta（果蝇黑素原配体）具有同源性，但是缺少重要的DSL结合结构［8］。由于其整个结构和氨基酸的同源性，Dlk-1被归于同型EGF样家族蛋白，主要通过细胞间的链接调

6、节细胞生长和分化。Dlk-1在多种胚胎组织中髙表达，具有保持胚胎细胞处于未分化状态功能。在胎儿发育过程中，Dlk-1对肝细胞、骨骼细胞、神经元、胰腺细胞和肌肉细胞等的分化有重要作用［9-11］o而且有证据表明Dlk-1是中胚层分化的抑制剂［12］。通过D1A1基因敲除小鼠研究发现小鼠出现生长迟缓、骨骼畸形、脊柱侧凸、张力减退和肥胖症等表现［13］o实验证实Dlk-1在维持脐带血中无限制性干细胞的不分化和增殖状态中发挥着关键作用，决定着细胞的命运［14］。由此可见,Dlk-1在胚胎发育过程发挥着重要作用。成年后，Dl

7、k-1在机体大多数细胞中表达下降。但是现有文献报道Dlk-1在成年人前脂肪细胞、前B细胞、胰腺B细胞、胸腺细胞和肾上腺细胞中表达，并在脂肪形成、血细胞生成、胰腺、肾上腺的生长中发挥重要作用［15-16］o而且在很多肿瘤组织中也能检测到Dlk-1的表达。有学者利用氧化偶氮甲烷诱导敏感型A/J小鼠远端结肠癌模型，通过基因芯片技术发现Dlk-1表达明显增高，在多种结肠癌细胞系中也能检测Dlk-1的表达［17］o本研究通过免疫组织化学的方法检测Dlk-1蛋白在结肠癌组织的表达显著髙于癌旁组织，而且与肿瘤的分级、分期具有相关

8、性。因此，笔者初步认为Dlk-1在结肠癌的形成中发挥着重要作用。那么Dlk-1在结肠癌的形成中发挥着怎样的作用呢，推测可能是Dlk-1抑制结肠细胞分化，并促进其生长。这与之前的很多结论是相一致的，大量文献证实Dlk-1控制前脂肪细胞的分化，高表达Dlk-1的前脂肪细胞不能分化为脂肪细胞，抑制脂肪的形成，而且有研究发现胰腺B细胞增殖到最大时，Dlk-1表达量也