膜蛋白dlk1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义论文

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1、膜蛋白DLK1在肝细胞癌组织中的表达及临床意义论文【摘要】目的探讨DLK1蛋白及甲胎蛋白（AFP）在肝细胞癌（HCC)组织中表达的临床意义。方法用免疫组织化学法检测88例HCC患者肝癌组织和癌旁肝组织中DLK1及AFP的表达。结果88例HCC患者肝癌组织中DLK1蛋白阳性50例（56.8%），AFP阳性39例（44.3%）。其中在AFP阴性组中仍有高达25.0%的DLK1蛋白呈明显的阳性表达。DLK1在肝癌组织中的阳性率明显高于AFP。所有患者癌旁肝组织DLK1蛋白及AFP均为阴性。结论DLK1蛋白检测对HCC有重要的诊断价值，肝组织DLK1蛋白和AFP联合检测可以

2、明显提高HCC的病理诊断率。【关键词】肝肿瘤肝细胞癌DLK1蛋白甲胎蛋白免疫组织化学肝癌是较为凶险的一种恶性肿瘤，好发于东南亚及非洲。肝癌在我国男、女性恶性肿瘤死亡率中分别排第2和第3位，每年有约11万人死于肝癌，约占全世界肝癌死亡人数的45％［1］。深入研究肝癌的诊断和鉴别诊断，特别是发现新的诊断指标，对于肝癌的防治有重要的意义。本研究通过在肝细胞癌（HCC)肝组织标本中联合检测甲胎蛋白（AFP）和DLK1蛋白.freel，10%甲醛固定。采用链酶菌抗生物素蛋白-过氧化酶法（SP法）进行免疫组化染色，用PBS替代一抗作为空白对照，正常组织作阴性对照，用已知AFP和

3、DLK1阳性片作阳性对照。石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O2作用切片10min，灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗，柠檬酸微波抗原修复，自然冷却后PBS冲洗，滴加一抗(DLK1和AFP均为1∶100倍稀释），37℃1h取出PBS冲洗，滴加二抗（DLK1为兔多克隆抗体，AFP为鼠单克隆抗体），37℃30min，取出PBS冲洗，DAB显色210min，自来水终止反应，苏木精复染，烘干，中性树胶封片。1.4阳性结果的判断标准癌细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性，无棕黄色颗粒为阴性。1.5统计学处理采用χ2检验，P＜0.05为差异有显著性。2结果2.1HCC肝组织中AFP和DLK

4、1表达HCC组织中DLK1阳性率为56.8%(50/88)，DLK1阳性细胞在肝癌组织中呈散在或小片状分布，DLK1多分布在细胞质，部分分布胞外基质中（图1A）。而在癌旁肝组织中无DLK1阳性表达（图1B)。HCC组织中AFP阳性率44.3%(39/88)。AFP阳性细胞在肝癌组织中呈集聚性分布，AFP多分布在细胞质内（图1C）。癌旁肝组织中无AFP阳性表达（图1D）。的表达情况（免疫组化染色，×40）A.肝癌组织DLK1表达；B.癌旁肝组织DLK1表达；C.肝癌组织AFP表达;D.癌旁肝组织AFP表达2.2DLK1蛋白的表达与HCC临床病理特征的关联性分析见表1。

5、结果显示，60岁以上的HCC患者DLK1阳性率明显高于60岁以下者(P0.05)，DLK1蛋白的表达与其他临床病理因素无关（P＞0.05）。表1DLK1蛋白表达与HCC临床病理特征的关系2.3肝癌组织AFP和DLK1蛋白表达的对比分析见表2。表2肝癌组织AFP和DLK1蛋白表达的关系3讨论DLK1蛋白又叫脂肪前体细胞因子1，在细胞分化方面起到一定的作用，尤其在内胚层起源的肝细胞、呼吸道上皮细胞中有表达，随着胎儿胎龄的增加，正常组织中DLK1的表达逐渐减少。本组实验发现，DLK1可在HCC组织中阳性表达，在正常肝组织中不表达，这也许与癌细胞高度增殖有关［2］，因此探讨

6、其在肝癌组织中的表达对于HCC的诊断有重要意义。AFP是由胚胎卵黄囊细胞、胎儿肝细胞和肠道细胞合成的一种糖蛋白，通常情况下，人们认为AFP是HCC较特异、灵敏的标志物，AFP的表达与癌细胞的分化程度、肿瘤的大小有关，分化程度高或低的癌不产生或很少产生AFP，中等分化的癌细胞的形态、功能与胚胎肝细胞相似，产生AFP的能力较强［3］。本组实验结果显示，DLK1在HCC中阳性率较高，这一点与AFP极其相似。相比较而言，同等分化的HCC中DLK1的阳性表达要比AFP为高，因此我们认为在HCC免疫指标中DLK1比AFP更具有诊断价值。另外，根据我们的体会，在病理学水平检测DL

7、K1蛋白的表达过程中，要注意抗体的稀释度、孵育时间、显色时间的控制，尽量减少人为因素造成的实验结果的误差，以保证实验结果的可靠性。【