比色法测定苹果中可溶蛋白质含量.ppt

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1、考马斯亮蓝法测定苹果组织微量可溶性蛋白含量2011级化学生物学吴凡郭梦雨1实验准备2实验实施3结果分析4结论2实验准备果蔬可溶性蛋白质含量是果蔬品质和营养的重要评价指标之一。许多可溶性蛋白是构成果蔬中酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控。因此，果蔬组织可溶性蛋白含量的测定就显得尤为重要。3实验准备实验原理考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下时最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测

2、定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。4实验准备实验原理5实验准备考马斯亮蓝法优点：灵敏度高；测定快速、简便，只需加一种试剂；干扰物质少缺点：去污剂、、十二烷基硫酸钠等干扰测定；标准曲线有轻微非线性6实验实施主要仪器及试剂：分光光度计；电子天平;容量瓶25ml十个；50ml烧杯2个；BSA新鲜苹果；Tris、外援添加物等7实验实施(1)试剂的配制：·标准蛋白溶液的制备：配制100μg/mL的BSA溶液·提取缓冲溶液：pH7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8和9.0梯度Tris-HC

3、l缓冲液(100mmol/L)·梯度浓度Tris-HCl缓冲液(pH9.0)：10、30、50、80、100mmol/L·外援添加物：EDTA(1mmol/L)、PVP(1g/100mL)、NaCl(0.15mol/L)、抗坏血酸(2mmol/L)、MgCl2(0.5mmol/L)、、半胱氨酸(2mmol/L)、β-巯基乙醇(2%，V/V)8实验实施（2）实验操作步骤称取苹果果肉1g加入不同缓冲液5mL，研磨离心，取上清液8mL低温保存9实验实施实验操作步骤开启分光光度计，预热20分钟标准溶液吸光度的测定标准曲线的绘制待测液的测

4、定10结果分析表一：不同吸光度值对应BSA含量BSA含量µg020406080100吸光度A00.1440.2680.3660.4470.541线性回归率为0.9990，线性方程y=186.33X-4.8440。11结果分析不同缓冲体系对可溶性蛋白提取效果的影响1.不同缓冲液及其pH1-11分别代表水、pH为7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8、9.0的Tris-HCl缓冲溶液12结果分析2.不同浓度1-6分别表示浓度为0、10、30、50、80、100mmol/L的pH为9.0的Tris-HC

5、l缓冲溶液13结果分析3.不同外援添加物A-J分别代表抗坏血酸、半胱氨酸、EDTA、PVP、β-巯基乙醇、NaCl、MgCl2、PVP＋β-巯基乙醇、PVP＋EDTA、EDTA＋PVP＋β-巯基乙醇14结果分析苹果组织可溶性蛋白质含量的测定项目吸光度蛋白含量μg蛋白含量%平均值%10.26043.6034.8834.9320.26344.1635.3330.25843.2334.5815结论实验最终确定的适用于苹果果实可溶性蛋白含量测定的提取条件为，0.1mol/L,pH为9.0的Tris-HCl提取缓冲液(内含1mol/LED

6、TA和1%PVP)，此条件下，果实可溶性蛋白的有效测定含量为34.93%（mg/g）16感谢学校给予我们这次宝贵的机会！感谢老师们的帮助！请老师和同学批评指正！17