超高效液相色谱法测定浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物香豆素.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第11期2013年11月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1744～1748DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．30370超高效液相色谱法测定浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物香豆素杨英来杨涛杨玉华郭龙刘小花李应东封士兰(兰州大学药学院，兰州730000)(甘肃中医学院，兰州730000)(兰州佛慈制药股份有限公司，兰州730000)摘要建立了用超高效相液相色谱法同时测定浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物补骨脂素、花椒毒素和佛手

2、柑内酯含量的方法。样品用甲醇超声提取后，用WatersACQUITYBEHC柱(100mm×2．10mm，1．7m)分离，以乙腈一水做流动相，梯度洗脱，柱温为30℃，流速为0．45mL／min，检测波长为245am，进样量为3IxL。结果表明，在一定的浓度范围内，补骨脂素、花椒毒素和佛手柑内酯的浓度与峰面积线性关系良好，相关系数r为0．9992～0．9996，样品的加样回收率为96．20％一102．42％，RSD为1．5％一3．0％。本方法简便、快速，精密度高、重现性好。本方法可用于浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物补骨脂素、花椒

3、毒素和佛手柑内酯的含量测定。关键词浓缩当归丸；当归药材；超高效液相色谱法；香豆素1引言浓缩当归丸是由当归药材提取物浓缩后与当归药材细粉制成的浓缩制剂，收载于1998年《卫生部药品标准中药成方制剂》(第十七册)。具有养血活血、调经止痛功效。当归属植物普遍含有香豆素类化合物，现已从当归属植物中分离得到7O余种香豆素，且多为呋喃香豆素，其中线型香豆素的种类较多_lJ。补骨脂素、花椒毒素和佛手柑内酯同属补骨脂素类，其中花椒毒素是一个具有强光敏性的呋喃香豆素类天然化合物J。补骨脂素和花椒毒素与长波紫外线联用可治疗牛皮癣、白癜风、覃样霉菌等皮

4、肤病J。口服补骨脂素类化合物的补骨脂素加长波紫外光照射疗法有较严重的短期毒性反应和长期风险，如头晕，视力模糊等症状，停药后症状缓解。这通常被认为是由于所给的补骨脂素类药物浓度过高以及与之匹配的过量长波段紫外光相关；佛手苷内酯所引起的黑斑在皮肤上可持续数年，不易痊愈。这些问题限制了含有这些成分的中成药在临床上的使用。张彦杰等采用分散液．液微萃取测定中药中的4种呋喃香豆素，他们还采用中空纤维脂质体筛选中药中香豆素类和木脂素类有效成分』。目前，国内未见对口服呋喃类香豆素限量的具体规定；关于浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物补骨脂素、花椒

5、毒素和佛手柑内酯的含量测定的研究也未见文献报道。兰州佛慈制药股份有限公司生产的浓缩当归丸成为第一个在欧盟申请注册中国中成药药品，为了确保浓缩当归丸的安全性，加快浓缩当归丸走进欧盟市场，必须严格控制浓缩当归丸中补骨脂素、花椒毒素与佛手柑内酯的含量。本研究建立了超高效相液相色谱法同时测定浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物补骨脂素、花椒毒素和佛手柑内酯的含量方法，为浓缩当归丸和当归药材安全性评价和欧盟注册提供了科学依据。2实验部分2．1仪器与试剂超高效液相色谱仪、ACQ—QSM型四元泵、ACQ-FrN型自动进样器、ACQ—PDA检测器、

6、Millenium3色谱工作站，WatersTQDetector质谱仪(Waters公司)；KQ-400DB超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；2013-04—19收稿；2013-07—17接受本文系“十二五”国家科技支撑计划课题(No．2011BA105B02)资助项目E-mail：fengshl@Lzu．edu．crl第l1期杨英来等：超高效液相色谱法测定浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物香豆素1745EYELAOsB-2100旋转蒸发仪(日本东京理化公司)。补骨脂素(HPLCi>98％)、花椒毒素(HPLC≥98％)、佛手柑内

7、酯(HPLC≥98％)，购自上海顺勃生物技术有限公司；甲醇(分析纯，天津北方天医化学试剂厂)；甲醇(色谱纯，山东禹王试剂公司)；乙腈(色谱纯，德国默克公司)；纯净水(兰州大学第一医院生产)。浓缩当归丸：当地某药店购买；当归药材，经甘肃中医学院中药系晋玲教授鉴定为当归Angelicasinensis(Oliv．)Diels的干燥根，主产于甘肃的定西地区、陇南地区以及四川省和云南省。2．2实验方法2．2．1提取溶剂及提取条件的选择根据补骨脂素、花椒毒素和佛手柑内酯的性质及参考文献[10～13]，本实验分别以甲醇、乙醇、氯仿、氯仿一乙醇

8、(70：30，v／v)进行超声、索氏和回流提取的对比研究，结果表明，甲醇超声提取效率较高。进一步考察了提取次数、时间和提取溶剂体积对提取率的影响。结果表明，当超声提取次数为2次、提取时间每次30min、提取溶剂体积分别为60和40mL时提取效率最高