高效液相色谱法同时测定少毛北前胡中6种香豆素论文

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1、高效液相色谱法同时测定少毛北前胡中6种香豆素论文陈二林刘小花李文封士兰胡芳弟宋平顺【摘要】建立了同时测定少毛北前胡中6种香豆素(香柑内酯、蝉翼素、丝立尼亭、顺3′，4′二千里光酰基3′，4′二氢邪蒿内酯、白花前胡丁素和白花前胡素E)含量的HPLC分析方法。色谱柱为LotValidationC18(150mm×4.6mm,5μm)柱;流动相为甲醇水;流速为0.8mL/min;检测波长为323nm;柱温30℃。6种香豆素在一定范围内线性良好，相关系数为0.9992～0.9999;精密度RSD均低于3.95%;平均回收率为93.0%～98

2、.6%。本方法简便、快速、准确;并对其中一种香豆素化合物进行分离纯化，通过核磁、质谱等光谱分析方法确认了此化合物的结构。【关键词】少毛北前胡，香豆素，高效液相色谱法，结构1引言前胡(RadixPeucedani)是一种应用广泛的传统中药.freel白花前胡(P.praerutorum)的干燥根，现代药理研究证明前胡对支气管炎、高血压、冠心病等有一定的疗效1。少毛北前胡(Peucedunumharrysmithiivarsubglabrum)，商品习称硬杆前胡，主产于甘肃省的陇南、天水、陇东等地区2。香豆素类成分是前胡的主要有效成分，已测定了正

3、品前胡中总香豆素及部分香豆素的含量3～5，而对于少毛北前胡中香豆素的含量测定未见报道。本研究建立了HPLC测定少毛北前胡中6种香豆素(香柑内酯、蝉翼素、丝立尼亭、顺3′,4′二千里光酰基3′,4′二氢邪蒿内酯、白花前胡丁素和白花前胡素E)含量的方法。本方法快速、准确，可用于少毛北前胡的质量控制。运用柱色谱及制备HPLC，分离纯化了其中的一种香豆素化合物，利用核磁、质谱及文献对照确认了此化合物的结构，首次从少毛北前胡中分离得到此化合物。此外，分析比较了少毛北前胡与正品前胡中的香豆素成分，为少毛北前胡作为正品前胡代用品可行性研究提供了科学依

4、据。2实验部分2.1仪器与试剂Ultimate3000高效液相色谱仪(戴安公司)，包括四元泵、PhotodiodeArray检测器、手动进样器;GILSON制备高效液相色谱仪(依利特公司)，包括C18制备柱(250mm×20mm,10μm),SHIMADZUVPODS分析柱，UV/VIS152检测器;HP5988气质联用仪(美国热电公司);MercuryPlus400M核磁共振波谱仪(Varian公司);R和CNMR数据及与文献6～9对照确认了它们的结构(见图1)。以HPLC面积归一化法分析，纯度均少毛北前胡于2006年9月采自甘肃省不同

5、县，经甘肃省药品检验所生药室宋平顺主任药师鉴定。甲醇为色谱纯(山东禹王试剂公司)，水为二次蒸馏水，其它试剂为分析纯，购于天津科密欧试剂公司，色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产。1.香柑内酯(bergapten);2.蝉翼素(pteryxin);3.丝立尼亭(selinidin);4.顺3′,4′二千里光酰基3′,4′二氢邪蒿内酯(cis3′,4′disenecioyl3′,4′dihydroseselin);5.白花前胡丁素(peculedanumⅡ，PdⅡ);6.白花前胡素E(pecucedanumⅢ，PdⅢ)。2.2色谱条

6、件LotValidationC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)，流动相为甲醇水，洗脱程序如下：0～9min，V(甲醇)∶V(水)=77.5∶22.5;9～18min，100%甲醇;18～25min，V(甲醇)∶V(水)=77.5∶22.5。流速为0.8mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL;检测波长为323nm。2.3对照品溶液的制备准确称取各对照品适量，用甲醇溶解并定容，得到0.0204g/L香柑内酯、1.964g/L蝉翼素、0.0264g/L丝立尼亭、0.1014g/L顺3′，4′二千里光酰基3′，4′二氢邪蒿

7、内酯、0.1642g/L白花前胡丁素和0.1106g/L白花前胡素E的对照品储备液，4℃贮存备用。2.4样品溶液的制备分别取甘肃不同产地的少毛北前胡、白花前胡和紫花前胡药材，粉碎，过0.30mm孔径筛，准确称取1.000g，分别加氯仿50,40和30mL，超声提取，每次30min，合并滤液，蒸干氯仿，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，经0.40μm的微孔滤膜过滤，取续滤液进样，测定。3结果与讨论3.1化合物4的分离纯化与结构鉴定3.1.1分离纯化少毛北前胡药材经甲醇提取，氯仿萃取后所得浸膏，先经硅胶柱色谱进行粗分离，洗脱剂为石油醚乙酸乙酯，所得

8、部分通过HPLC分析，摸索出所需物与杂质较好的分离条件后，采用制备HPLC进行分离纯化，富集所需样品。色谱条件为V(甲醇)∶V(水)=80∶20，室温