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时间:2020-03-23
《纳米纤维固相萃取柱萃取-高效液相荧光法分析头发皮质醇.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第40卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第1期2012年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry124~128纳米纤维固相萃取柱萃取一高效液相荧光法分析头发皮质醇陈利琴康学军晏嫣顾忠泽陆祖宏(东南大学儿童发展与学习科学教育部重点实验室,南京210096)(东南大学苏州研究院苏州市环境与生物安全重点实验室,苏州215123)摘要采用基于纳米纤维固相萃取的高效液相色谱一荧光测定(HPLC-Flu)法测定头发中的皮质醇水平。以新型纳米纤维萃取柱(PFSPE)提取头发样本浸出
2、液,用100uL乙醇洗脱,再加入230txL浓HSO反应2min,反应物加水混合后用PFSPE柱提取,最后用5OuL甲醇直接洗脱后注入色谱体系进行分析。此方法的检出限为0.05ng/g(S/N=3),日内精密度和日间精密度分别低于6.8%和8.9%,平均方法回收率为88.9%。本方法提取过程简便、快速、环保,而且可以准确测定头发样本中的皮质醇水平。关键词纳米纤维;头发;皮质醇;皮质酮;高效液相色谱;荧光检测1引言在精神生物学研究中,皮质醇(啮齿类动物是皮质酮)是一种非常重要的激素,它被称为“压力荷尔蒙”,人体面
3、临生理、心理刺激时,其分泌量增高(应激反应)【1]。目前研究中采用的血液、唾液、尿液等样本测试皮质醇的水平,只能反映应激及时变化或一定时间内的累积情况。而对于研究对象一段时间(数月以上)的应激情况进行了解,就可以采用头发这种生物样本。研究证实,头发能够反映人体长期的摄药信息(可以追溯到几个月之前),头发皮质醇是一种很好的研究长期下丘脑一垂体一肾上腺轴(HPA轴)活性的工具,可以客观测量慢性应激嘲。Pereg等指出,在诸多心梗发病征兆中,头发的皮质醇水平是判断发病风险最明显的生物学标志物。采用头发基质,对于分析测
4、试具有很多优势,如头发生长规律,为研究者提供一种追溯性研究窗口;头发采样无创、简便、无需专业指导;头发样本可以室温储存等闭。头发皮质醇分析将成为生理学、精神医学、体育医学、认知科学、心理学等众多学科的重要研究手段。目前,头发中皮质醇测定多采用放射免疫法、酶联免疫法及LC—MS法[6]。免疫法灵敏度较高,能够检测出头发中的痕量皮质醇,但存在交叉反应、测定结果偏高。各种商业性的免疫试剂盒测定的结果差异性较高,试剂盒的成本也较昂贵。LC-MS法虽然准确灵敏,但需要昂贵的仪器,故一般实验室难以普及。此外,还有HPLC—
5、Flu法测定头发中皮质醇分布的报道,采用传统SPE和溶剂萃取的方法分别提取头发浸出液和硫酸衍生产物。本研究优化改进了头发样本前处理操作,用本研究组建立的基于电纺纳米纤维的固相萃取技术(Packed-fibersolid-phaseextraction,PFSPE)阻取代文献方法SPE和溶剂萃取步骤,省略了挥发提取溶剂浓缩目标物的操作,使热不稳定的目标物提取效率大大提高,同时使前处理操作时间大大缩短、操作更为简便,实现了头发中皮质醇的高效灵敏检测。2实验部分2.1仪器与试剂LC一20AD高效液相色谱仪、RF一10
6、AXL荧光检测器、SIL一20AC自动进样器、CTO一20A柱温箱均购自Et本岛津公司;DDS—PH计(上海理达仪器厂)、离心机(无锡瑞江公司);XW-80A漩涡混合器(t2海青浦沪西仪器厂);ALl04一IC分析天平(METTLERTOLEDO);MM400冷冻混合型球磨仪(德国莱驰公司);HY_2调速多用振荡器(常州国华电器有限公司);XWy一01型纳米纤维固相萃取柱(苏州先伟纳米技术有限公司)。201l—O5—24收稿;201l一08一o4接受本文系国家“973”基金项目(No.2007CB936300)
7、,江苏省工业支撑项目资助(No.SBE201000676),苏州市科技计划资助(Nos.SYJG0912,SYN201006,SG201028)和东南大学优秀博士论文基金资助E-mail.xjkang64@163.com第1期陈利琴等:纳米纤维固相萃取柱萃取一高效液相荧光法分析头发皮质醇125皮质醇(又名氢化可的松)和皮质酮标准品购自中国药品生物制品检定所;甲醇(色谱纯,山东禹王化学品公司),HSO、乙醇等其它试剂分析纯。实验用水为重蒸去离子水。2.2色谱条件岛津VP-ODSC色谱柱(150mmX4.6mlTl
8、,5um);荧光检测波长:激发波长360llm,发射波长480nm;流动相:甲醇一0.05g/L醋酸铵(70:30,v/pH5.0,H3PO4调节)。流速:1.0mL/min,进样量:50。2.3溶液配制标准溶液:精密称取皮质醇标准品适量,加甲醇溶液配制成0.1g/L的标准储备液。工作溶液需每天临用前用甲醇稀释至相应的浓度,在一4℃保存。内标溶液:精密称取皮质酮标准品适量,加甲醇溶液制
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