柱后衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定面粉中的过氧化苯甲酰.pdf

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1、第40卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第3期2012年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry466～469DOI：10．3724／SP．J．1096．2012．10835柱后衍生一高效液相色谱一荧光检测法测定面粉中的过氧化苯甲酰马明肖玲艳盛亚红黄姣俞雄飞(宁波出入境检验检疫局技术中心，宁波315012)(通标标准技术服务有限公司宁波分公司，宁波315040)摘要利用过氧化苯甲酰能够在氯化血红素的催化下将底物对羟基苯乙酸氧化成具有荧光的二聚体的性质，建立了柱后衍生一高效液相色谱一荧光检测法测定面

2、粉中过氧化苯甲酰的方法。优化了色谱分离条件和柱后衍生条件，结果表明：催化剂氯化血红素的浓度为8gmol／L，底物对羟基苯乙酸的浓度为80I．tmol／L，衍生化试剂的pH10．5，衍生温度为35℃时衍生效率最高。在优化条件下，过氧化苯甲酰的线性范围为O．5～100mg／L；样品的检出限为1mg／kg，样品的加标回收率为98．5％～99．5％。本方法与现有的高效液相色谱法相比，检测面粉中过氧化苯甲酰具有抗干扰能力强，灵敏度高。关键词柱后衍生；高效液相色谱；荧光检测法；过氧化苯甲酰引言过氧化苯甲酰(Benzoylperoxide，BPO)是一种

3、重要的有机过氧化物。由于BPO对小麦面粉具有后熟、增白等作用，长时间被用作面粉改良剂。然而，过氧化苯甲酰不仅能破坏面粉中的维生素A、E等营养成分，而且还会产生对人体有害的苯甲酸和苯酚等有害物质。2011年2月11Ft，卫生部联合六部委下发了《关于撤销食品添加剂过氧化苯甲酰、过氧化钙的公告(2011年第4号)》，要求自2011年5月1Et起，禁止在面粉中添加过氧化苯甲酰。目前，过氧化苯甲酰的检测方法主要有高效液相色谱法】、毛细管电泳法、气相色谱法、间接碘量法[6]、紫外分光光度法及静态注射化学发光法[91等。高效液相色谱一荧光检测法测定某些有

4、机过氧化物的方法已有报道，一般是采用辣根过氧化酶(HRP)q1或氯化血红素(Hemin)[12,131作为催化剂，以对羟基苯乙酸为底物测定有机过氧化物。然而，目前报道的这此类方法仅限于测定过氧化氢、过氧酸类的有机过氧化物等水溶性有机过氧化物，对过氧化苯甲酰的研究未见报道。本研究以氯化血红素为催化剂，对羟基苯乙酸为反应底物，采用柱后衍生一高效液相色谱一荧光检测法检测面粉中过氧化苯甲酰。由于该衍生反应具有一定的专属性，因此本方法与现有的高效液相色谱法相比，检测面粉中过氧化苯甲酰具有抗干扰能力强，前处理简单，灵敏度高等优点。2实验部分2．1仪器与

5、试剂Alliancee2695型高效液相色谱仪，配有2475型荧光检测器(美国Waters公司)；PINNACLEPCX型柱后衍生器(美国PICKERING公司)；S40K型pH计(瑞士Mettler公司)；甲醇和乙醇(色谱纯，迪马科技公司)；氯化血红素(分析纯，Sigma公司)；对羟基苯乙酸(98％，Acros公司)；过氧化苯甲酰、85％HPO、氨水(25％)、NHC1、冰乙酸(分析纯，国药集团)。2．2实验方法2．2．1衍生试剂的配制2．68gNHC1溶于200mL水，加入30mL氨水，定容至500mL；将2．6mg氯化血红素和6．6m

6、g对羟基苯乙酸溶于500mL上述缓冲溶液中，即得柱后衍生试剂。2．2．2色谱条件色谱柱为SunFiC。柱(250mmX4．6mmX5um)，流动相为含有0．1％乙酸的甲醇一水2011-07-28收稿；201卜09-30接受本文系国家质量监督检验检疫总局科研计划项目(No．2011IK217)资助E～mail：mare@nbciq．gov．cn第3期马明等：柱后衍生一高效液相色谱一荧光检测法测定面粉中的过氧化苯甲酰(85：1v／)体系，流动相在使用前用0．45gm滤膜过滤，流速为0．6mL／min，柱温为2O℃，样品盘温度为4℃。2．2．3衍

7、生条件衍生化试剂为含有8gmol／L氯化血红素和80~mol／L对羟基苯乙酸的NHC1一NH，·H：O缓冲溶液(pH10．5)。流速为0．2mL／min，反应管温度为35℃；荧光检测器激发波长315nm，发射波长400nm。2．2．4样品处理取1．0g面粉于10mL比色管中，加入2mL乙腈，充分摇匀以沉淀面粉中的蛋白质，再用乙醇定容至10mL，充分振荡混匀，用0．45um滤膜过滤后进样。人Y3结果与讨论3．1衍生反应本方法基于的柱后衍生反应如下式：一对羟基苯乙酸在Hemin的催化下被过氧化苯甲酰氧化成能够产生荧光的二聚体2，2L二羟基一联苯

8、一5，5，_二乙酸，而过氧化苯甲酰则被还原成苯甲酸。3．2色谱条件的优化3．2．1流动相的选择实验表明，甲醇一水体系作为流动相，过氧化苯甲酰的响应峰峰形拖尾较为严重，加人少量乙酸