固定相优化液相色谱法对候选新药雷公藤衍生物进行有关物质检查.pdf

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE1研究简报82011年81LiChineseJournalofAnalyticalChemistry1266～1269固定相优化液相色谱法对候选新药雷公藤衍生物进行有关物质检查陆静象丽丽季吱陈东英(中同科学院上海药物研究所，}海201203)摘要米用同定相优化液相色谱法(POPLC)建立了候选新药雷公藤衍生物(T8)中有关物质的检查疗法。分圳采5种同类型的同定相色谱短柱对含有T8和有关物质的混合溶液进行实验，流动卡H为乙腈一水(35：65，，V)，流速为0．5mL／min，柱温为30℃，检洲波K219ilm，获得相应各样死

2、时间、各组分保留时间和理论板数。经々¨软件进行汁拟合，得到优化的色谱柱组合为20mm氰件+801TUTI氨基键合桴。结果表明l述优化色潜条件下，10min内呵实现T8与有关物质之间的良好分离，并I：1r于号察T8的强制性破坏溶液。关键词同定相优化；液相色谱：药物；有关物质；雷公藤衍生物l引言定相优化液相色谱法(POPLC)是基于Nyiredy提的“PRISMA”原理，通过不同同定相色谱柱的绀合实现液相色谱条件优化的技术。1。由于不同类型的固定相色谱柱对于待分离组分具有同的保留机理，此为液相色谱条件的优化提供r正交选择性，从而提高了液相色谱条件优化的有效性。¨前商

3、品化的POPLC色谱柱和号门优化软件已经由德同Bischof公一J开发成功El1，几』提供不同}∈度的c朴、C性，氨基键合C．柱(EPS柱)，氰基键合硅胶柱(CN柱)和苯基键合硅胶住(Ph柱)。L1前有关POPLC的应用报道尚有限，主要涉及对7种黄酮类化合物的分离、12种杀虫剂成分的分离[2,31，埘混合甾体化合物的分离、爆炸物的分离研究1，甲状腺激素中的杂质分析以及13种寡从混合物的分离DJ。(5R)一5-羟基雷公藤内酯醇(T8)是雷公藤甲素5位羟基化的结构修饰产物，具有抗炎、免疫抑制的活性。作为治疗类风湿性关节炎的候选新药，目前正在临床试验阶段。为了保证T8

4、临床疗效的安全有效性．开展T8中有关物质的检查是一项重要研究内容。有关物质来源于合成原料、反应中问体、剐产物以及药物在货架存放期间可能出现的降解产物。有关物质不具有治疗作用，反而口f能影响药物的疗效，甚至可能具有安全隐患，如毒副作用、致癌性或致畸性。在T8中可能涉及到的已知有关物质化学结构如}冬11所示，其中Imp1和T8为一对差向异构体，极性差别较小，这两者问的分离将是考验色谱分离能力的关键指标。本研究采用POPLC法对T8中可能存在的有关物质建立快速“普查”式的色谱分离，并初步评价POPLC技术在开发有关物质检查的方法学特点。2实验部分2．1仪器与试剂Dio

5、nexUltiMate3000高效液相色谱仪，配备自动进样器、柱温箱、PDA一3000检测器和Chromeleon色谱作站(德国Dionex公司)；纯水机为Mill—Ointegral3(美国Millipore公一J)。甲醇与乙腈均为HPLC级(德国Merck公司)，雷公藤甲素(Imp2，批号200502)和尿嘧啶(批号200401)均购自中国药品生物制品检定所(北京)。T8和其它有关物质Impl、Imp3、Imp4、Imp5和lmp6均南本所合成。实验用水经纯水机纯化。POPLC色谱柱套装包含ProntoSILPhenyl柱(Ph柱)，ProntoSILCl8

6、柱(Cl8柱)，ProntoSILC30住，ProntoSILEPS柱(EPS柱)和ProntoSILCN柱(CN柱)，长度分别为20，40，60和80mm(3mmi．d×201fI216收稿；201卜o428接受本文系国家科技重大号项重大新药创制课题综合性大平台项目(No2009ZX0931001)和中德科学中心复杂样品的分离分析项U(No．GZ364)资助Email：dychen@mailshcncac．cn第8期陆静等：固定相优化液相色谱法对候选新药雷公藤衍生物进行有关物质检查5gm)及优化软件(德国BischoffChromatography公司)。0O

7、R3OHOOO0000图1T8及6个已知有关物质的化学结构Fig．1Chemicalstructuresof(5R)5hydrOxytriptolide(T8)anditssixknownrelatedsubstances2．2实验方法流动相为乙腈水(35：65，V／V)；流速为0．5mL／min；柱温为30℃；检测波长为219nfl；进样量为10uL。分别称取T8与有关物质(Imp1，Imp2，Imp3，Imp4，Imp5和Imp6)，按一定比例制成混合溶液用于系统适用性实验。另取适量T8分别在强酸(0．1mol／LHC1，室温放置1h)、强碱(0．1mol／

8、LNaOH，室温放置1h