原料奶、婴儿配方奶粉及酸奶中蛋白去除效果的研究.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第1期2010年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry77～8l原料奶、婴儿配方奶粉及酸奶中蛋白去除效果的研究丁晓静，杨媛嫒'李芸，赵珊王志(北京市疾病预防控制中心，北京100013)(河北农业大学食品科学与技术学院，保定071001)(首都医科大学公共卫生与家庭医学学院，北京100069)摘要建立了毛细管电泳法分析a一乳白蛋白哥L球蛋白A及卢哥L球蛋白B的方法，考察了不同浓度冰乙酸(HAc)及三氯乙酸(TCA)对原料奶、婴

2、儿配方奶粉A和B及酸奶中蛋白的去除效果。结果表明，TCA去除蛋白效果优于HAc，不同样品所需TCA浓度不同：2g原料奶需3mL100g／LTCA；O．5g婴儿配方奶粉A和B分别需5mL10L及2Og／LTCA；2g酸奶则需3mL20LTCA才能将蛋白完全沉淀。为原料奶、婴儿配方奶粉及酸奶等乳制品的样品前处理提供了有价值的参考。关键词乳制品；婴儿配方奶粉；酸奶；蛋白质；毛细管电泳1引言色谱法分析原料奶、婴儿配方奶粉及酸奶等乳制品中有益或有害化学成分时，必须除去其中的蛋白以得到准确结果，因为蛋白很容易在色谱柱上产

3、生不可逆吸附，导致柱效下降。牛奶蛋白主要由酪蛋白和乳清蛋白组成，其中酪蛋白约占总蛋白的80％，乳清蛋白约占15％。乳清蛋白是酪蛋白沉淀后上清液中含有的蛋白，主要由Ot．乳白蛋白(a—Lac)、哥L球蛋白(一Lg)、免疫球蛋白G(IgG)和牛血清白蛋白(BSA)组成。其中d．Lac约占乳清蛋白的3％，．Lg约占9％，IgG约占2％，BSA约占1％，其它为非蛋白氮(NPN)。而一Lg又由—LgA及一LgB组成。冰乙酸(HAc)及三氯乙酸(TCA)是常用蛋白沉淀剂。文献报道的使用量一般为1％，该用量能否将上述3种样

4、品中的蛋白去除干净，需分析蛋白沉淀后的样品上清液中是否仍有蛋白残留。因此，有必要建立能够准确测定乳清蛋白中含量较高的．Lac，卢一LgA及一LgB的方法，以监测去除蛋白前后3种蛋白含量的变化，获知蛋白的去除效果。毛细管电泳(CE)法因其非常适合蛋白分析而成为首选方法。常用的CE法一般利用涂层管或裸管，通过往分离缓冲液中添加高分子聚合物以实现蛋白分离一。有关。Lac，—LgA及JB．LgB分离的研究已见报道，但无定量数据。本研究建立了CE同时分离并测定O／一Lac，．LgA及』B．LgB的方法，考察了HAc和T

5、CA对原料奶、婴儿配方奶粉及酸奶中蛋白的去除效果。2实验部分2．1仪器与试剂BeckmanP／ACE5000型毛细管电泳仪(美国Beckman公司)，配备紫外检测器；P／ACE工作站；F一33pH／mV型酸度计(北京屹源电子仪器科技公司)；Universal32型离心机(德国Hettich公司)；Milli．poreMilli—Elix／RiOs型超纯水器(美国Millipore公司)；旋涡混合器(法国Gilson公司)。硼酸(优级纯，铁岭地区开源化工厂)；CsOH·HO(99．5％，北京百灵威化学技术有限公

6、司)；冰乙酸(99％)和NaOH(北京化学试剂公司)；羟丙基．环糊精(HP．cD，分子量：1540g／mo1)，聚氧化乙烯(PEO，分子量：4000kg／too1)，0c—Lac，／3-LgA及．LgS(Sigma．Aldrich公司)。原料奶采自当地奶牛场，婴儿配方奶粉及大果粒酸奶购于当地超市。2g／LPEO储备液：称取0．2gPEO于100mL试剂瓶中，加入100mL水后于5Oc【=水浴中加热直至溶解，摇匀后于室温放置备用。—Lac，卢一LgX及-LgB储备液：准确称取10mgot-Lac，10mg．Lg

7、A2009-04-10收稿；2009-07-23接受本文系jE京市卫生局青年基金(No．QN2007．13)和北京市卫生局“十百千”基金资助十E-mail：dingxiaojing@gmail．corn：wangzhi@hebau．edu．cn78分析化学第38卷及10mg／3一LgB于1．5mL塑料离心管中，分别加入1mL水溶解，得到质量浓度为l0L的标准储备液。短期保存可置于4℃冰箱，若长时间保存，则将标准储备液分装后于一2O℃冻存。工作液由储备液经0．05mol／LHAc稀释后制得。2．2电泳条件2．2

8、．1测定条件毛细管(50IxmX57em有效长度：50em，河北永年锐沣色谱配件有限公司)。分离缓冲液：0．5mol／LH3B03+0．025mol／Li4r,-~-CD+0．8g／LPEO，pH9．10(1mol／LCsOH调节)；样品介质：0．05mol／LHAc。分离电压：14kV；检测波长：214nm；操作温度：25cc；进样压力及时间：3．448kPa，5S；工作电流：约80A。2．2．2