化学发光免疫分析检测人血清中的癌胚抗原.pdf

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第1期2011年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry95～98DOI：10．3724／SP．J．1096．2011．00095化学发光免疫分析检测人血清中的癌胚抗原薛盼章竹君张晓明(陕西师范大学化学与材料科学学院，陕西省生命分析重点实验室，西安710062)摘要基于辣根过氧化物酶(HRP)催化HO：氧化3(4_羟苯基)丙酸(PHPPA)，生成能发荧光的3(4_羟苯基)丙酸二聚体，在乙腈介质中，在增强剂咪唑参与下，与双[2，4，

2、6-U_氯苯基]草酸酯(TCPO)和HO反应产生强化学发光。用辣根过氧化物酶(HRP)标记癌胚抗原(CEA)单克隆抗体，通过CEA的双抗夹心免疫反应，建立了简单、灵敏和快速检测人血清中的癌胚抗原(CEA)含量的化学发光免疫分析方法。CEA在1．O～80．0g／L范同具有良好的线性关系；检出限为0．3~tg／L(S／N=3)，相对标准偏差(n-11)为3．9％。已成功用于人血清样品中CEA含量的测定。关键词癌胚抗原；酶催化荧光反应；化学发光免疫分析1引言癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CE

3、A)是存在于细胞表面的富含多糖的蛋白复合物，分子量约为15000~20000，多在结肠、乳房、肺腺癌和大多数上皮来源的肿瘤中表达。对血清中CEA进行定量检测，在恶性肿瘤的诊断、评估病变范围、预测评估疗效、监测复发等方面发挥着重要的作用。检测CEA的常用方法有放免法(RIA)和酶联免疫法(ELISA)】。RIA法敏感性高，但存在放射性同位素损伤和污染、不稳定等弊端，容易对操作人员造成伤害。ELISA法稳定性好且简便易操作，但敏感性不及RIA法。近年来发展了荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法一]、脂质体免疫分析法等，

4、这些方法操作简便，灵敏度高。化学发光分析方法与免疫分析相结合已经成为化学与医学交叉的研究热点，它具备了化学发光的高灵敏度，也拥有免疫分析方法高特异性的优点，对提高目标物质定量分析的检出能力具有重要意义]。其检测反应多采用辣根过氧化物酶(HRP)催化对碘苯酚增强的鲁米诺同H：O：的化学发光反应。已有多种试剂盒用于临床检测。与鲁米诺化学发光体系相比，过氧化草酸酯化学发光体系具有更高的发光量子产率，通常可高达30％，且发光持续稳定时间长，能够通过较长时间成像或者在一定时间内对发光进行积分，进一步提高测定灵敏度。文献[9

5、]采用异硫氰酸荧光素或8一苯氨基一卜萘磺酸作为抗体的标记物，对过氧化草酸酯(TCPO)化学发光体系进行免疫分析。由于标记物的测定不存在催化放大作用，反应介质为水溶液，使TCPO化学发光体系的量子产率降低，灵敏度低于荧光免疫分析法。HRP能催化3(4一羟苯基)丙酸(PHPPA)与H：0：的反应，可将其作为电子的供体来构建电位免疫传感器。本实验用HRP标记CEA抗体，通过双抗夹心法，在免疫反应完成后，二抗上的HRP催化H0：氧化PHPPA生成荧光物质3一(4_羟苯基)丙酸二聚物(PHPPADimer)。在乙腈介质中，

6、利用咪唑增强的TCPO—HO一PHPPADimer化学发光反应进行化学发光测定。此方法简便、快速、仪器设备简单，灵敏度高于ELISA法和鲁米诺化学发光免疫法。2实验部分2．1仪器与试剂MPI—A型多功能化学发光分析仪(西安瑞迈分析仪器有限公司)；ACQ一600超声波发生器(西安翔达超声技术工程部)；HC一3018R高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)；精密pH计(上海雷2010-06-21收稿；2010-0815接受本文系中央高校基础研究基金(NoGK20091004)资助项目E—mail：zzj18

7、@hotmail．com96分析化学第39卷池仪器厂)；隔水式电热恒温培养箱(上海市跃进医疗器械一厂)；XK96型微量振荡器(姜堰市新康医疗器械有限公司)。CEA诊断试剂盒(郑州博赛生物技术股份有限公司)；乙腈(国药集团化学试剂有限公司)；5．0mmol／LTCPO(自制)的乙腈溶液；1．0mol／LH：O：一乙腈溶液；1．0mmol／L咪唑(天津市远航化学品有限公司)乙腈溶液；0．05mol／LH2O2缓冲溶液；0．05mol／L3-(4_羟苯基)丙酸(PHPPA，AcrosOrganics公司)缓冲溶液；H2

8、O2，Na2CO3，NaHCO3，Nail2PO4，Na2HPO4，NaOH，H3BO3、Na2B4O7，CH3COONa，三羟甲基氨基甲烷(Tris)，HC1，柠檬酸均购白西安化学试剂厂。TCPO和H0的乙腈溶液使用时再用相同溶剂稀释至所需浓度；PHPPA和H：O水溶液用pH6．0磷酸盐缓冲溶液稀释至所需浓度。所有试剂均为分析纯。水为离子交换水，再经石英蒸馏器亚沸蒸馏制