光谱法研究木糖醇与人血清白蛋白的相互作用.pdf

《光谱法研究木糖醇与人血清白蛋白的相互作用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第32卷第1期广西师范大学学报：自然科学版Vol_32NO．12014年3月JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEditionMar．2O14光谱法研究木糖醇与人血清白蛋白的相互作用杨国平。，杨峰(1．广西师范大学化学与药学学院，广西桂林541004；2．广西师范大学药用资源化学与药物分子工程国家重点实验室培育基地，广西桂林541004)摘要：本文采用荧光猝灭光谱和紫外一可见吸收光谱研究木糖醇与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。结果表明木糖醇对HSA有较强的荧光猝灭作用，荧光猝灭机理属于

2、二者形成复合物所引起的静态猝灭和非辐射能量转移；根据不同温度下木糖醇对HSA的荧光猝灭作用，利用Stern-Volmer方程处理实验数据，得到木糖醇与HSA之间的结合常数K^为2．46×10mol·L(298K)和lIO1×10mol·L(308K)，结合位点数”分别为0．9228和0．9970。根据不同作用温度时非共价结合复合物的热力学参数变化，证明木糖醇与人血清白蛋白分子间的结合力主要是静电引力。研究结果为进一步研究木糖醇的药理和保健作用，尤其是对血浆蛋白构象的影响和新药品的开发提供了重要信息。关键词：木糖醇；人血清白蛋白；相互作用；荧光猝

3、灭中图分类号：Q512．1文献标识码：A文章编号：1001—6600(2014)01—0095—05天然产物活性成分与蛋白质的相互作用研究已成为当今的研究热点之一口]。木糖醇是从白桦树、橡树、玉米芯、甘蔗渣等植物中提取出来的天然植物甜味剂，可以做营养补充剂、辅助治疗剂。木糖醇是人体糖类代谢的中间体，能促进肝糖元合成，具有防龋齿特性，可广泛用于食品、医药、轻工等领域]。研究木糖醇与人血清白蛋白的相互作用对研究木糖醇的药理和它在有机体内的分布来说非常重要。人血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白成分，是由585个氨基酸组成的单链状的球形蛋白。人血清白蛋

4、白能够结合大量的各种底物，包括金属阳离子、脂肪酸、氨基酸和各种各样的药物。值得令人关注的是各种药物结合到HSA上显示出各种药物的分布、自由度和新陈代谢等的改变l_5]。因此，探讨药物与人血清白蛋白问的相互作用，能够提供药物的有意义的信息，并且能够作为一个模型来说明药物与蛋白的络合。]，对探讨药物在体内的代谢过程及临床合理用药具有重要的指导作用_8。本实验运用荧光光谱和紫外光谱研究木糖醇和人血清白蛋白(HSA)的相互作用的光谱特征，由荧光猝灭现象和Forster非辐射能量转移理论求得了木糖醇和HSA的结合常数、结合位点和结合距离，并从热力学参数推

5、出二者之间的作用力类型。1实验部分1．1实验仪器和材料RF一5301PC荧光光度计(Shimadzu)；Cary一100UV—Visspectrophotometer紫外分光光度计(Varian)；AI一204电子分析天平(梅特勒·托利多(上海)有限公司)；pHS3C型数字酸度计(上海智光仪器仪表有限公司)。人血清白蛋白、木糖醇(美国Sigma公司)；Tris—HC1缓冲液，pH7．4；实验所用试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。收稿日期：2013—11-11基金项目：国家自然科学基金资助项目(31060121，21171043)；广西自然科学基

6、金资助项目(2012GXNSFCB053001)通信联系人：杨峰(1974一)，男，江西东乡人，广西师范大学教授，博士。E—mail：jxyangfeng@gmail．com广西师范大学学报：自然科学版第32卷1．2实验方法准确移取3mI1mol／LHSA于比色皿中，用Tris—HCI缓冲液调pH值，分别按照HSA与木糖醇浓度比为1：0、1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7往比色皿中加入木糖醇(3vL／次)，混合均匀，保持温度为25℃，以280nm为激发波长，狭缝宽度为15nm，在300~450nm内扫描荧光发射光谱；保持温度

7、为35℃，按照上述方法再扫描一次荧光发射光谱。准确移取3mLTris—HC1缓冲液于比色皿中，扫描基线，按测荧光比例，加入木糖醇溶液，混合均匀，扫描紫外光谱。2结果与讨论2．1HSA的荧光猝灭光谱实验选用298K和308K两个温度。在本实验条件下，木糖醇溶液荧光强度很弱，对HSA的荧光发射光谱无影响，图1是298K时，HSA与不同量木糖醇相互作用时的荧光发射光谱图，其发光特征是由于HSA的214位的色氨酸残基的发光所致。由图可知：固定HAS的量，随着木糖醇的量不断增加，HSA发射峰的荧光强度不断降低，发生了荧光猝灭现象，且峰的位置发生了蓝移。H

8、SA分子中色氨酸残基具有较强的疏水性，且其荧光光谱对微环境的变化敏感，峰蓝移说明木糖醇的加入，使HSA分子中色氨酸残基附近的极性降低，处于更加疏水的环