光谱法研究根皮苷与人血清白蛋白相互作用

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1、光谱法研究根皮苷与人血清白蛋白相互作用摘要：在模拟生理条件下，采用荧光光谱、紫外光谱和同步荧光光谱法研究了根皮苷(Phlorizin)与人血清白蛋白（HSA）的相互作用。结果表明：根皮苷能使HSA发生内源荧光猝灭，属静态猝灭机理。在293K、303K和313K下，根皮苷与HSA的结合常数分别为3.1635×105、1.7748×105、1.1935×105L∙mol-1∙s-1，结合位点数n近似为1；热力学分析表明根皮苷与HSA间的结合力为氢键及范德华力；根据Förster非辐射能量转移理论求得二者结合距离为3.97nm；同步荧光光谱表明根皮苷

2、主要与HSA中的色氨酸残基发生相互作用，改变色氨酸周围的局部构象；金属离子的介入会影响根皮苷与HSA的结合能力。关键词：根皮苷；人血清白蛋白；荧光猝灭；热力学参数StudyonInteractionbetweenPhlorizinandHumanSerumAlbuminbySpectroscopicMethodsAbstract:TheinteractionofPhlorizinwithhumanserumalbumin(HSA)wasstudiedbyfluorescencespectrometry,UV-Visibleabsorptions

3、pectrometryandsynchronousfluorescencespectrometry.TheresultsshowedthatPhlorizincouldinducedanendogenousfluorescencequenchingofHSAunderamechanismofstaticquenching.Thebindingconstantsweredeterminedtobe3.1635×105(293K),1.7748×105(303K)and1.1935×105(313K),respectively.Thebinding

4、site(n)wasabout1.ThethermodynamicparameterssuggestedthattheinteractionforcesbetweenPhlorizinandHSAweremainlyhydrogenandvanderwaalsforce.,Thebindingdistancewasestimatedtobe3.97nmaccordingtoFörsternonradiationenergytransfermechanism.TheresultssynchronousfluorescencespectraofPh

5、lorizin-HASsystemshowedthatPhlorizinmainlyinteractedwithtryptophaninHSA,leadingtoalocalchangeinproteinconformation.Inaddition,theadditionofthecommonionscouldaffectedthebindingconstantofPhlorizin-HSAcomplex.Keywords:phlorizin;humanserumalbumin;fluorescencequenching;thermodyna

6、micparameter根皮苷(Phlorizin)是一种具有明显生物活性的天然化合物，其化学成分是1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮，主要从苹果、苹果树皮及叶中提取而得。现代药理学研究表明根皮苷具有抗氧化、抗肿瘤及防治糖尿病、美白等生理功效[1-3]。人血清白蛋白（HSA）是人血浆中最丰富的功能蛋白，也是人体内重要的小分子药物结合蛋白，具有运输转运脂肪酸、氨基酸以及多种药物功能[4]。深入研究HSA与药物小分子的结合作用，不仅可以从分子水平上阐述药物小分子的药效作用机理，而且对药物的体外筛选

7、、合理开发利用以及设计更加有效的药物分子具有重要的理论指导意义。因此，HSA与药物小分子的相互作用研究已成为生命科学、医学和环境科学等领域的重要研究课题。而有关根皮苷与HSA的相互作用研究尚未见文献报道。本实验采用荧光光谱和紫外光谱法研究了根皮苷与HSA的相互作用机理，得到了根皮苷与HSA相互作用的猝灭常数、结合常数、结合位点数及结合距离，根据热力学参数确定了其相互作用力类型，采用同步荧光光谱法研究了根皮苷对HSA构象的影响，并考察了5种金属离子对根皮苷与HSA结合作用的影响，为阐明根皮苷在体内的输送和代谢过程、了解其生物学作用机理提供了实验依

8、据。1实验部分1.1仪器与试剂RF-5301型荧光分光光度计（日本岛津公司）；UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；501A型超级数显恒温