光谱法研究阿奇霉素与人血清白蛋白的相互作用.pdf

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1、北京石油化工学院学报第19卷第3期Vo1．19NO．3JournalofBeijingInstituteof2011年9月Sep．2011PetrochemicalTechnology光谱法研究阿奇霉素与人血清白蛋白的相互作用*王腾何晓囡张志红郭晓燕张丽慧张讳相秉仁。(1．北京石油化工学院制药工程系，北京1026l7；2．中国药科大学分析测试中心，南京210009)摘要由于阿奇霉素对人血清白蛋白的内源性荧光具有猝灭作用，且猝灭方式为静态猝灭。采用荧光光谱研究了模拟生理条件下大环内酯类抗生素阿奇霉素与人血清白蛋白的相互作用，计算了二者相互作

2、用的结合常数K和结合位点数”，并根据不同温度下的热力学函数确定了阿奇霉素与人血清白蛋白的相互作用力类型为疏水作用和静电引力。采用同步荧光光谱和傅立叶变换红外光谱探讨_r阿奇霉素对人血清白蛋白构象的影响，结果表明阿奇霉素明显改变了人血清白蛋白的构象。关键词阿奇霉素；人血清白蛋白；荧光光谱；傅立叶变换红外光谱中图法分类号R914．1阿奇霉素是克罗地亚Pliva公司开发研制的意义。目前，有关这方面的研究已有许多报的大环内酯类抗生素，其结构如图1所示。它道，但有关阿奇霉素与人血清白蛋白相互作具有抗菌谱广，生物半衰期长，组织渗透性高，用的研究尚未见

3、报道。笔者采用荧光光谱法研化学和生物稳定性好，不良反应小，耐受性好等究了生理条件下阿奇霉素与HSA的相互作用特点。日前，阿奇霉素在临床中广泛用于呼吸机制，利用阿奇霉素对HSA的荧光猝灭作用，道、皮肤软组织及泌尿生殖系统感染等的绘制出阿奇霉素对HSA的荧光猝灭曲线，并治疗。获得不同温度下阿奇霉素与HSA的结合常数K和结合位点数，利用热力学常数确定了它们之间主要的作用力类型。采用同步荧光技术考察阿奇霉素对HSA构象的影响，并利用红外光谱定量的表征了HSA二级结构的变化，从分子水平上阐述阿奇霉素与HSA的相互作用及作用机理。罔1阿奇霉素的结构1

4、实验部分药物小分子与人血清白蛋白(Human11主要仪器与试剂SerumAlbumin，HSA)之间的相互作用研究F一4500型荧光分光光度计(日本日立公司是生命科学、化学、药学和临床医学工作者共同生产)；BrukerTENS{)R27傅立叶变换红外光关注的研究领域。药物进入人体后，通过血浆谱仪(美国珀金埃尔默公司生产)，ZnSe衰减全的贮存和转运到达受体部位并产生药效。研究反射(ATR)附件，I'E—DIaTGS检测器，()PUS药物与人血清白蛋白之间的相互作用有助于了数据处理软件；pHS一25型数显酸度计(中国上解药物在体内的运输和分

5、布情况，对于阐明药海精密科学仪器有限公司生产)；AI204一IC分物的作用机制、药代动力学特征等有非常重要析天平(瑞士梅特勒一托利多集团生产)；电子数字恒温仪(中国金坛恒丰仪器厂生产)。收稿日期：201104一l1*北京石油化工学院URT项目，项目号：201oJool39。用0．9NaC1水溶液配制0．01mol／I三56北京石油化工学院学报2010年第19卷的升高而增大。而静态猝灭是猝灭剂和荧光物数；72为结合常数。以lg(F。一F)／F对lg[Q]质分子在基态时生成不发光的配合物，从而导作图，如图4所示。阿奇霉素与HSA在27℃致荧光

6、物质荧光强度降低的过程，升高温度将和37℃下的结合常数K及结合位点数见导致配合物的稳定性降低，因此静态猝灭常数表2。将随温度的升高而减小。麓根据式(1)，以F0／F对所加入的阿奇霉素0浓度[Q]作图，得到阿奇霉素对人血清白蛋白=一。．2内源性荧光猝灭过程的Stern—Volmer猝灭曲-0．4线，如图3所示。由图3可以看出，随着温度的升高，Stern—Volmer猝灭曲线的斜率减小，即：猝灭过程的猝灭常数随温度的升高而减小，表明猝灭机理为静态猝灭。根据拟合曲线求得猝灭常数K。及K见表1，不同温度下的K。都远大于猝灭剂对生物大分子的最大动态

7、猝灭速率常数2．0×10L／(tool·s)l_】，进一步说明阿奇霉素对人血清白蛋白的荧光猝灭属于静态猝灭。Hf△G／AS／R(kJ·(kJ·(J·mol1)mol1)mol1)275．92×1040．96790．99939—6．49—27．4169．73375．44×1040．97060．999776．4928．1069．73[01×10M图3阿奇霉素对HSA荧光猝灭的2．4阿奇霉素与人血清白蛋白相互作用力类Stern-Volmer曲线型的确定表1阿奇霉素对HSA荧光猝灭的药物和蛋白质等生物大分子之间的结合力Stern—Volmer方程

8、主要有氢键、范德华力、静电引力和疏水作用等，由相互作用前后热力学参数焓变△H和熵SternVolmerKsv×10／Kq×10。／(I·D11，r、¨方程(I．mo1)(mo1．s))儿变A5