新型肿瘤靶向性溶瘤痘苗病毒VV△TK△N1L-RFP对小鼠4T1乳腺癌模型的治疗作用.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheantitumourefficacyofanoveltumour--targetedoncolyticvacciniavirus一一一zxTKaNlL．RFPoncoWucVacClnlavlrusVVA1LPl‘ot-treatmentofmouse4T1breasttumourmodel．Postgraduate：JinliWangSupervisors：ProfsGuocongJiaandYaoheWangDepartmentofBre

2、astSurgerytheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityJune2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：力刍西、∥日期：Ⅵ，蛑衫月荫学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定

3、，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。、，学位论文作者：二／侈∥欠，t．／日期：7f+年6月6日中文摘要新型肿瘤靶向性溶瘤痘苗病毒VVATIC～N1L．RFP对小鼠4T1乳腺癌的治疗作用硕士研究生导师王金礼贾国丛教授王尧河教授郑州大学第三附属医院乳腺外科郑州450

4、052背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率已上升至女性恶性肿瘤第一位，严重威胁女性的生命健康。随着现代手术技术的提高以及化疗、放疗等辅助治疗手段的应用，乳腺癌患者的总体生存率得到了改善，但是每年仍有30％．40％的患者出现复发和转移，导致患者死亡【1．3】。因此，在临床研究中迫切需要寻找一种有效的乳腺癌治疗手段。肿瘤靶向性溶肿瘤病毒(Tumour-targetedoncolyticvirus，TOVS)是目前恶性肿瘤研究的新热点，其原理在于溶瘤病毒可以特异性地在肿瘤细胞中复制，进而溶解肿瘤细胞，而这种溶瘤作用对正常细胞无影响【4．5]。研究发现TOV

5、可通过多重作用机制来发挥抗肿瘤效果，包括直接溶解细胞、表达毒性蛋白、诱导细胞凋亡、深入诱导抗肿瘤免疫以及关闭宿主蛋白合成等，正是病毒治疗机制的多样性，国际上越来越多的研究者开始把目光转移到溶瘤病毒治疗方面来【6．7】。最近研究发现痘苗病毒N1L蛋白是引起神经毒性的重要因素，同时该基因产物可通过与IKK复合物的靶向结合来抑制NF．kB和IRF3活性，诱导细胞凋亡，从而拮抗宿主细胞的免疫反应[8．10】。因此，N1L的删除不仅可增加TOV安全性，更重要的是增强机体对其更强的免疫反应，有可能增强其抗肿瘤效果。我们实验室在VVATK(在野生型Lister痘苗病毒的基础

6、上敲除TymidineKinase(TK)基因的病毒株)的基础上敲除NIL基因来降低病毒毒性，同时并期望能够激起机体更强的免疫反中文摘要应。本研究通过体外、体内对比研究该病毒对小鼠4T1乳腺癌的治疗效果和生物安全性。目的探讨新型肿瘤靶向性溶瘤痘苗病毒WATI丛N1L．RFP及VVATK对小鼠4T1乳腺癌的治疗作用。方法第一部分：溶瘤病毒的制备及鉴定，采用聚合酶链式反应(PCR)方法检测溶瘤痘苗病毒TK及NIL基因的删除；第二部分：体外，检测溶瘤病毒对4T1细胞毒性，即采用MTS(3．(4，5．dimethylthiazol-2·y1)-5-(3-carboxy

7、methoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H—tetrazolium)法检测新型肿瘤靶向性溶瘤痘苗病毒VVATKAN1L-RFP和对照痘苗病毒WaTK对BALB／C小鼠乳腺癌细胞株4T1的杀伤作用，计算其EC50值(即杀死50％细胞所需要的病毒量)；采用TCID50(Tissuecultureinfectivedose50％)法检测新型肿瘤靶向性溶瘤痘苗病毒VVATKANlL．RFP和对照痘苗病毒w△TK在乳腺癌细胞株4T1中的复制能力；第三部分：体内实验，通过建立小鼠4T1乳腺原位及转移模型，检测新型肿瘤靶向性溶瘤痘苗病毒WATK

8、ANlL．RFP和对照痘苗病毒VVAT