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《抑制mirna 21的表达对胆管癌细胞增殖 凋亡 侵袭的影响及其靶基因的探讨.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、英文缩略词表英文缩写英文名称中文名称miRNAmicroRNA微小核糖核酸CCAcholangiocarcinoma胆管癌DEPCDiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMSODimethylsulfoxide二甲基亚飒dsRNADoublestrandedRNA双链RNAmRNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸PBSPhosphatebufferedsaline磷酸缓冲盐PIPropidineiodide碘化丙锭RT-PCRReversetranscriptpolymerasechain逆转录一聚合酶链式反reaction应cDNACompl
2、ementaryDNA)互补DNAdNTPDeoxyribonucleosidetriphosphate)脱氧核糖核昔三磷酸FCMFlowcytometry流式细胞术MTT3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5,diphenytetrazoliumbromide四偶氮哇盐UTRUntranslatedRegions非翻译区MAP3K8mitogen-activatedproteinkinasekinase有丝分裂原被激活的蛋白激kinase8酶激酶激酶8maspinmammaryserineproteaseinhibitor乳腺serpinserineprot
3、easeinhibitor丝氨酸蛋白酶抑制因子ROCreceiveroperatingcharacteristiccurve受试者工作特征曲线MMPsmatrixmetalloproteinases,基质金属蛋白酶抑制miRNA-21的表达对胆管癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其靶基因的探讨摘要胆管癌是常见的胆道恶性肿瘤之一，其恶性程度高，且发病隐匿，早期诊断困难，手术切除率低。近年研究发现多种MicroRNA（miRNA）的表达异常L肿瘤的发生发展密切相关。其中，miRNA・21在胆管癌组织中呈高表达并起着癌基因的作用。本研究通过抑制人胆•管癌细胞RBE中miRNA-21的表达，观察
4、RBE细胞增殖、凋亡及侵袭的变化，并进一步探讨miRNA・21在RBE细胞中的作用机制。目的:通过转染miRNA-21抑制剂，抑制人胆管癌细胞株RBE细胞miRNA-21的表达，观察RBE细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的变化，并探讨miRNA・21在胆管癌细胞中可能调控的靶基因及其作用机制。方法：以人胆管癌细胞RBE细胞为研究对象，根据处理方法不同，细胞分为四组：止常细胞组（cell组）、脂质体组（仅予脂质体，lipo组））、阴性对照组（转染无关序列，miRNA・21・NC）、miRNA-21抑制组（转染miRNA・21抑制剂,miRNA-21-IN）o经荧光定量PCR证实转染成功
5、后，应用MTT方法检测细胞增殖活性的变化，应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化，通过Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力的改变，通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测RBE细胞中RECK,maspinmRNA及蛋白表达的改变。结果：miRNA・21在经转染miRNA・21抑制剂后在RBE细胞中的表达得到有效抑制，荧光定量PCR结果显示与正常细胞相比，其表达下降了0.0014倍。MTT结果显示RBE细胞在抑制miRNA・21表达后增殖活性明显受到抑制（Pv0.05）,流式细胞仪结果显示各组细胞凋亡率分别为2.29%(cell),2.43%(lipo),2
6、.89%(miRNA-21-NC),19.35%(miRNA-21-IN),miRNA-21的表达降低后，RBE细胞的凋亡率明显增高(PV0.05),各组细胞Transwell小室显微镜下细胞计数分别为：54.0±2.1(cell),45.4±3.2(lipo),40.8±2.4(miRNA-21-NC),19.2+1.5(miRNA-21-IN),实验组RBE细胞相对于对照组其侵袭力明显下降(PvO.05)并且荧光定量PCR及westernblot结果显示在miRNA・21抑制后，RECK,maspinmRNA及其蛋白的表达明显上调(PvO.05)。结论通过抑制miRNA-21的表
7、达可抑制RBE细胞的增值，促进RBE细胞的凋亡，降低RBE细胞的侵袭力，RECK及maspin作为miRNA-21的靶基因参与调控过程。尖键词：胆管癌miRNA-21增殖凋亡侵袭EffectsofSuppressingtheExpressionofmiRNA-21ontheProliferation,ApoptosisandInvasionabilitiesinHumanCholangiocarcinomaCellsandaStudyofItsTarget
