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1、总花色苷含量测定—分光光度法1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A的方法[1]:(1)当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,计算公式为:A=(Amax-A620)-0.1(A650-A620)(2)含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:a)直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。计算公式为:A=Amax 直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250-800nm下全波长扫描,得到花色苷在0.1%盐酸—80%乙醇中的可见光区最大吸收波长
2、,在此最大波长下测定各样品的吸光值A。b)pH示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8]。计算公式为:A=(Amax-A700)pH1.0-(Amax-A700)pH4.5 pH示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0)稀释,另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M,pH4.5)稀释,将稀释液平衡15min后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700n
3、m处的吸光值A。2、花色苷总含量的测定[2]：通过波长扫描,确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。利用花色苷的结构特性,当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰,而当pH为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。计算公式为:C(mg/g)=(A0-A1)×V×n×M/(ε×m)式中:A0、A1—分别为pH1.0、pH4.5时花色苷在λmax处的吸光值V—提取液总体积(mL)n—稀释倍数M—cy-3-glu(矢车菊-3-葡萄糖苷)的相对分子质量(449.4)ε—cy-3-glu的消光系数(29600)m—样品质
4、量(g)3、花色苷含量TAcy的计算公式为(以天竺葵色素-3-葡萄糖苷计)[3]:TAcy(mg/hg)=(A×433×10×V）÷(22400×m)×100 A=(OD500nm-OD700nm)pH1.0-(OD500nm-OD700nm)pH4.5式中:V—提取液的总体积(mL)m—取样量(g)22400—天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数433—天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔分子量。4、花色苷含量测定[4]样品处理:将各品种的干燥样品粉碎(40目)后,准确称取0.5g用10mL65%的酸性乙醇提取24h,提取3次,然后将3次提取液混合抽滤,真空旋转挥发回收
5、乙醇,用蒸馏水定容到100mL,摇匀,静止备用。测定方法:含量测定用pH示差法,按照下面公式计算,测定3次取其平均值。C(mg/L)=(OD×M×DF×1000)/α×1式中:OD为吸光度,DF为稀释倍数,M为分子量,α=26900。花色苷[5]：将提取液稀释合适倍数，用1cm比色杯测其吸光值，参照Fuleki[6]的计算方法转换成总花色苷浓度，公式如下：C/(mg/mL)=(A×MW×DF×1000)/(ε×1)式中：A为吸光值；MW为分子量（以矢车菊素-3-葡萄糖苷为标准[7]，449.4）；DF为稀释倍数；ε为消光系数，26900L.cm-1.mg-1。参考文献[
6、1]霍琳琳,苏平,吕英华,分光光度法测定桑葚总花色苷含量的研究[J].酿酒,2005年7月,第32卷第4期.[2]李颖畅,孟宪军,张琦,于娜，蓝莓果主要物质含量及处理方式对其花色苷的影响[J].食品工业科技,Vol.29,No.05,2008.[3]盛小娜,王璋,不同预处理方式对速冻草莓花色苷含量的影响[J].冷饮与速冻食品工业,2006年12月第12卷第4期.[4]王振江,肖更生，廖森泰等，不同品种桑椹的抗氧化作用与其花色苷含量的相关性研究[J].蚕业科学， 2006，32(3).[5]吕英华，苏平，那宇，李辉,桑椹色素体外抗氧化能力研究[J].浙江大学学报(农业与生
7、命科学版)33(1)：102～107，200[6]FulekiT，FrancisFJ．Quantitativemethodsforanthocyanins．1．Extractionanddetermine-ationoftotalanthocyaninincranberries．D]．FoodSei．，1968.33：72-78[7]SuhHJ，NohD0，KangCS，eta1．ThermalkineticsofcolordegradationofmulberryfruitextractD]．NahrungFood．2003．47(2)
