花生种胚组织培养.doc

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1、花生种胚离体培养及植株再生专业：种子科学与工程年级：10-2姓名：梁冰摘要：以花生种胚为实验材料，研究其在不同激素的培养基配方中培养的生长状况尤其是丛生芽数。结果显示：高浓度6-BA诱导芽生成，低浓度诱导根生成；高浓度的NAA有助于芽的生成，低浓度NAA有助于根的生成。关键词花生种胚浓度芽生成根生成Thepeanutembryoastheexperimentalmaterialtostudyitsculturegrowthintheculturemediumofdifferenthormones,especiallythenumberofbuds.Theresult:hig

2、hconcentrationsof6-BAinducedbudgenerated,inducedbylowconcentrationsofrootgenerated;highconcentrationsofNAAtocontributetotheformationofbuds,andlowconcentrationsofNAAtocontributetotheformationoftheroot.　花生是我国及世界上重要的油用兼食用作物。通过离体培养丛生芽进行无性繁殖,对花生品种改良、良种繁育、基因工程研究和抗性筛选等都有重要意义。关于花生外植体芽诱导再生及丛生芽培养已有许

3、多报道。Atreya等用花生子叶切段诱导产生小植株。Narasimhula等在含有BA的培养基中使花生子叶形成花芽并开花结荚。李爱民等(1988)报道利用高浓度细胞分裂素的诱导分化培养基,直接诱导花生子叶再生幼芽。瞿桢等(1994)利用花生去子叶幼胚诱导出丛生芽。Mckently利用未成熟子叶在高浓度BA条件下培养,也诱导出丛生芽。吴爱忠等(1994)也有关于带叶腋茎段丛生芽培养成功的报道。但这些培养过程都较为繁琐,培养基复杂,培养效果也有待于提高。针对目前所存在的问题,我们利用较简化的培养基诱导花生种胚产生了丛生芽[1],并对生根与否进行了统计。1.材料与方法1.1材料花

4、生种子（由四川农业大学成都校区植物生理系实验室提供）1.2方法1.2.1材料的准备与处理取生活的花生种子灭菌，消毒处理后置于无菌瓶中，备用。1.2.2所用培养基的配置表一所用培养基中激素浓度培养基序号MS(mg/l)6-BA(mg/l)NAA(mg/l)1+3.00o.12+3.000.53+2.000.14+2.000.5“+”表示加入以上各培养基中以上培养基均加肌醇100mg/l，蔗糖30g/l，琼脂5g/l，各配500ml,水浴加热至透明，调PH于5.8左右[2]。1.2.3培养基的分装及灭菌按上述激素浓度，以500ml为配置标准，计算所需激素，以及肌醇、蔗糖等的需要

5、量，配置。将透明的500ml个培养溶液分装于16个锥形瓶中，每个试管中约装30ml。用牛皮纸封好，置于高压灭菌锅(121oC，0.1-0.15Mpa)中灭菌30min，灭菌后取出试管，让其中的培养基自然冷却凝固，7d后即可进行接种[3]。1.2.4接种将备用的无菌瓶置于超净工作台，在无菌瓶中倒入75%乙醇，浸没花生种子，消毒处理30min，无菌水洗2-3次，继续用0.1%升汞浸泡8-10min，适当震荡无菌瓶，充分消毒处理。无菌水洗5-6次[4]。用酒精灯消毒镊子，刀片。冷却后，却开花生种子，用刀片小心挑出花生的种胚，接种至已配置好的锥形瓶中，重新用牛皮纸封好。将接种后的培

6、养瓶置于培养室内光照(光照强度1500-2000lx,温度20oC-22oC)培养[5].每三天进行观察并记录实验现象。2.结果与分析表二各个培养基的实验结果显示培养基序号外植体数污染率存活率丛生芽数丛生芽诱导生根数生根率（块）%%（个）率%（个）%1362580.22980.6002211995.23095.20034421992.93890.5512.8表二说明NAA和6-BA不同浓度作用不同。2.16-BA对花生种胚离体培养的影响1组和3组，2和4组对照显示，污染率和存活率相差不大，丛生芽诱导率2组稍高。但生根主要是4组，2组统计结果为0。说明高浓度6-BA诱导芽生成

7、，低浓度诱导根生成。2.2NAA对花生种胚离体培养的影响1和2组，3和4组对照显示，2组的污染率稍低，存活率较高，丛生芽诱导率同样高于1组，均未生根。说明高浓度的NAA有助于芽的生成，低浓度NAA有助于根的生成。3.结论与讨论3.1结论6-BA和NAA浓度高低对丛生芽以及根的生成影响敏感。两者相比之下，高浓度的6-BA更有助于丛生芽的生成；高浓度的NAA更有利于根的生长[7]。3.2讨论结果说明合适的激素处理及激素组合是影响花生幼胚体外正常发育的重要因素，在某种程度上决定着幼胚的发育方向[8]。6-BA属细胞分裂素