花楸成熟种胚组织培养方法探究

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1、花楸成熟种胚组织培养方法探究材料与方法仁材料本试验中以花楸成熟种胚为外植体，种子采于黑龙江植物园的花楸成熟果实，调制后在49冰箱中贮存。将材料用自来水浸泡18h,然后用70%的酒精浸泡30s,再用2%的NaCIO溶液搅拌消毒处理10min，然后在无菌工作台上用无菌水冲洗5~7次，再用解剖刀切破种皮子叶端，剥出成熟胚待接种之用。2•方法1）不定芽的诱导：把成熟胚接种在附加了不同浓度的6-BA（6■节基氨基瞟時XNAA（蔡乙酸）的MS和WPM固体培养基上。每组激素组合接种6瓶，每瓶接种5个种胚。观察不定

2、芽生长状况，并在第20天开始统计不定芽诱导率。根据不定芽诱导率，选择最佳培养基与激素组合。2）不定芽的增殖：观察不定芽生长状况，当不定芽生长0.5cm时转接到附加了不同质量浓度的6-BA.IAA激素的MS增殖培养基上进行培养。3）不定芽的生根：将增殖到长度1.0-1.5cm的不定芽接种到附加了不同质量浓度的IBA或NAA的1/2MS培养基上，进行生根培养。4）培养条件：采用日光灯照射进行光照培养，光照16h，黑暗8h，光强2000~3000lx,温度（25±1）°C,湿度70%~80%

3、。5）数据统计：通过统计不定芽和生根的数量，分别计算出不定芽诱导率和生根率。不定芽诱导率=（诱导出不定芽外植体数/接种的外植体总数）×100%;生根率二（生根不定芽数/接入不定芽总数）×100%o结果与分析1•不同处理对花楸种胚不定芽诱导的影响1）不同基本培养基对花楸种胚不定芽诱导的影响：将接种在MS和WPM培养基上的花楸成熟种胚培养7d后，胚芽膨大，3周后部分成熟胚胚芽处出现不定芽。1个月后，不同培养基中花楸成熟胚不定芽诱导率岀现差异，诱导不定芽3周后统计诱导情况。在MS培

4、养基中，不定芽诱导率为80.33%;在WPM培养基中，不定芽诱导率为60.00%o经过X2分析得出,MS和WPM培养基上产生的不定芽诱导率之间有显著差异，即η=4.02>Xα=3.84O结果指出MS培养基对不定芽的诱导效果优于WPM培养基。2）不同激素质量浓度组合对花楸种胚不定芽诱导的影响：通过对激素质量浓度组合筛选，本试验中选择了不同质量浓度的6-BA.NAA组合研究其对不定芽诱导的影响。将花楸成熟种胚培养12d后，观察到生长很好的嫩绿不定芽,3周后部分不定芽长到1~2cm。1

5、个月后，不同激素质量浓度组合处理中花楸成熟胚不定芽的诱导率出现差异。由表2可以看岀，在附加NAA0・5mg/L和6-BA0.5mg/L的MS培养基中,不定芽诱导率最高达80.33%,经过X2分析得出，激素质量浓度组合5与组合1、3、4、6、7、9之间芽诱导率均有显著差异(X0.05=3.84),即η1-5=7.50>X0.05,η3-5=6.20>X0.05、η4-5=5.08>X0.05、η5-6=6.20>X0.05、η5-7=10.33>X0.05、&e

6、ta;5-9=5.08>X0.05,而其它各组合之间的芽诱导率无显著差异。在附加NAA1・0mg/L和6-BA0.5mg/L的WPM培养基中，诱导率最高为60.00%,经过X2分析得出，激素质量浓度组合6与组合1、2、8、9,组合2与组合7之间芽诱导率均有显著差异，即η1-6=5.45>X0.05、η2-6=4.29>X0.05、η5-8=4.29>X0.05、η5-9=6.78>X0.05,而其它各组合之间芽诱导率无显著差异。2•不同激素质量浓度组合对花楸种胚不定芽

7、增殖的影响经初代培养诱导不定芽，把不定芽转接到附加了不同质量浓度的6-BA、IAA的MS增殖培养基上进行培养，经过2周可进一步诱导增殖出5~13个不定芽，与初代培养诱导不定芽的情形相似。培养中，如激素6-BA质量浓度过高会出现玻璃化现象，在后期抑制根的生长。不同激素质量浓度组合对不定芽增殖的影响见表3。从表3可以看出，不定芽增殖的最佳激素组合和质量浓度为IAA0.5mg/L+6-BA0.2mg/Lo3•不同质量浓度的激素对花楸种胚不定芽生根的影响待不定芽高1.0-1.5cm时，从基部剪下，移至生根培

8、养基中，5d后芽基部陆续出现白色突起或愈伤组织,10-15d后可见发达的白色、黄绿色或红色主根，1个月后大量须根产生，并形成发达的根系。激素IBA质量浓度对生根数量的影响如表4所示。在1/2MS培养基中，IBA质量浓度为0・2mg/L,根数量最大，不定根诱导率为70%，根长随着IBA质量浓度的逐渐增高而渐渐变短，当IBA质量浓度为0.2〜0.3mg/L时，根长差别不大，然后根长逐渐变大，从根的生长状态来看，添加IBA的处理中根粗壮，须根多，移栽容易成活。激素NAA质量