花楸体胚发生的外植体和培养基效应及生化物质变化研究

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1、摘要花楸(SorbuspohuashanesisHedl。)具有重要观赏价值和经济价值。本研究以花楸成熟合子胚和未成熟合子胚为外植体诱导体胚发生，研究外植体、培养基对体胚发生的影响和体胚发生中的生化物质变化特点，为进行快速繁殖、生理生化研究及遗传工程研究提供有效离体培养系统服务。主要结果如下：(1)完整的合子胚是最适合花楸体胚诱导的外植体。以花楸成熟合子胚为外植体，不同产地体胚发生差异为吉林敦化>黑龙江森林公园>伊春五营森林公园>五常。以花楸未成熟合子胚为外植体，产地差异为吉林延吉>黑龙江森林公园>伊春植物园。7月中旬为最佳幼胚外植体取材时期。(2)花楸成熟合子胚为外植体时，M

2、S+NAA2．0mg‘L。1+6．BA1．5mg‘L4对诱导胚性愈伤组织和体胚发生效果最好，愈伤组织诱导率达91．67％，体胚发生率达30．67％。花楸未成熟合子胚为外植体时，MS+2,4．D0．2mg'Ld+6．BAl．0mg'Ld诱导效果最好，体胚发生率达到39．20％。MS+6．BAI．5nag’L-t+2'4．D0．5mg’L．1最适合继代培养。超过4次继代后几乎所有的体细胞胚愈伤组织化、褐化至死亡。在花楸体胚诱导阶段适宜暗培养。(3)胚性愈伤组织的淀粉含量、可溶性蛋白含量、非胚性愈伤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶活性均高于其他类型的愈

3、伤组织；可溶性糖含量在光下培养的愈伤组织中最高；细胞增殖速度缓慢的胚性愈伤组织中干物质含量明显高于细胞增殖速度较快的非胚性愈伤组织。一(4)可溶性糖含量最高的时期鱼雷形胚时期，淀粉含量最高时期为胚性愈伤组织时期，二者均在球形胚时期最低。SOD、POD活性均在胚性细胞向球形胚转化时下降，球形胚向心形胚发育时同样下降，从心形胚向鱼雷形胚和鱼雷形胚向子叶形胚发育时再升高；CAT活性从胚性细胞向心形胚至鱼雷形胚发育的3个时期内表现为下降．升高．下降的趋势，在鱼雷形胚向子叶胚发育时略有回升。关键词花楸；体细胞胚发生；外植体；培养基；生化物质东北林业大学硕}j学位论文AbstractSor

4、buspohuashanesisHedl．isanimportantornamentalandeconomicspecies．Theeffectsofexplantsandmediaonsomaticembryogenesisandbiologicalsubstancechangesduringsomaticembryogenesisofitwereconductedbytakingmatureandimmaturezygoticembryosasexplants，forthepurposeofprovidingeffectiveinvitroculturesystemfori

5、tsmieropropagation，physiologicalandbiochemicalstudies．Theresultsareasfollows：(1)IntactzygoticembryowasthebestexplantsforsomaticembryogenesisofSorbuspohuashanesis．ThesamplesitesequencefrombettertoworseofsomaticembryogenesisstatuswasJD，HS，YWandHWformaturezygoticembryoexplantsandJJ，HSandHYforim

6、maturezygoteembryoexplants．ThebestsamplingperiodforimmaturezygoticembryoexplantisthemiddleofJuly．(2)MS+NAA2．0mg'L。+BA1．5mg'L“wasthebestinductionmediumformaturezygoteembryoexplant,thecallusinductionmteWasupto91．67％，thesomaticembryoinitiationrateWasupto30．67％．MS+2．4-D0．2mg‘L吐+BA1．0mg'LqWastheb

7、estinductionmediumforimmaturezygoteembryoexplantandsomaticembryoinitiationrateWasupto39．20％．MS+BA1．5mg'L‘1+2．4-D0．5mg‘L～i,vastheoptimummediumforsubculture．Whensubculturegenerationsexceeded4，nearlytheentiresomaticembryochangedtocallus，thenbecamebrow