花生胚小叶高效再生体系的建立

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1、中国油料作物学报２０１３，３５（４）：３８９－３９３ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１３．０４．００６花生胚小叶高效再生体系的建立张月婷，黄家权，晏立英，雷永，廖伯寿（中国农业科学院油料作物研究所，农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，湖北武汉，４３００６２）摘要：以成熟花生种子的胚小叶为外植体，建立一套高效的花生再生体系，为进行外源基因的遗传转化奠定基础。研究结果表明，不同基因型胚小叶再生能力差异显著，以丰

2、花２号为最佳基因型。诱导培养基ＭＳＢ＋６－ＢＡ７ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＡｇＮＯ３２ｍｇ／Ｌ对丰花２号不定芽诱导和分化具有较好的效果，成苗率可高达５７．２２％；最适宜的分化和伸长培养基为ＭＳＢ＋６－ＢＡ３ｍｇ／Ｌ；在生根培养基ＭＳＢ＋ＮＡＡ１．５ｍｇ／Ｌ（或１ｍｇ／Ｌ）中，再生幼苗９６％以上可生根。再生植株经炼苗后移栽，９０％以上可正常生长。关键词：花生；胚小叶；基因型；再生中图分类号：Ｓ５６５．２０３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－９０８４（２０１３）０４－０３８４－０５Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅ

3、ｎｔｏｆａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｒｏｍｌｅａｆｌｅｔｏｆｐｅａｎｕｔＺＨＡＮＧＹｕｅ－ｔｉｎｇ，ＨＵＡＮＧＪｉａ－ｑｕａｎ，ＹＡＮＬｉ－ｙｉｎｇ，ＬＥＩＹｏｎｇ，ＬＩＡＯＢｏ－ｓｈｏｕ（ＯｉｌＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＧｅｎｅｔｉｃＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＯｉｌＣｒｏｐｓ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌ

4、ｔｕｒｅ，Ｗｕｈａｎ４３００６２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｐｅａｎｕｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｌｅａｆｌｅｔｓｏｆｍａｔｕｒｅｓｅｅｄｓｏｆ７ｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｖｅｌｏｐｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｅｅｄｌｉｎｇ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏ

5、ｕｓｂｕｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｓｈｏｏｔｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｘｉｓｔｅｄｉｎｐｅａｎｕｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓ，ａｎｄＦｅｎｇｈｕａ２ｗａｓｔｈｅｂｅｓｔｏｎｅａｍｏｎｇｔｈｅｓｅｃｕｌｔｉｖａｒｓ．ＭＳＢ＋６－ＢＡ７ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．６ｍｇ／Ｌ＋ＡｇＮＯ３２ｍｇ／ＬｗａｓｔｈｅｂｅｓｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｆｏｒＦｅｎｇｈｕａ２ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｓｈｏｏｔｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｗｉｔｈｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆ５７．２２％ｆｏｒｓｈｏｏｔｆ

6、ｏｒｍａｔｉｏｎ．ＴｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｍｅｄｉｕｍｆｏｒｂｕｄｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｗａｓＭＳＢ＋６－ＢＡ３ｍｇ／Ｌ；ｐｌａｎｔｌｅｔｓｏｖｅｒ９６％ｗｅｒｅｒｏｏｔｉｎｇｉｎＭＳＢ＋ＮＡＡ１．５ｍｇ／Ｌｏｒ１ｍｇ／Ｌ．Ａｂｏｖｅ９０％ｏｆｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｇｒｏｗｉｎｇｎｏｒｍａｌｌｙａｆｔｅｒｂｅｉｎｇｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｔｏｓｏｉｌ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅａｎｕｔ；Ｌｅａｆｌｅｔ；Ｇｅｎｏｔｙｐｅ；Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［３］花生

7、（ＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａＬ．）是世界范围内广泛究的重点。近年来，国内外许多学者开展了利用栽培的重要的油料作物之一［１］。然而，花生易受多［４～６］［７，８］［９，１０］［１１，１２］幼胚、胚轴、子叶、胚小叶、幼嫩叶种病虫害及干旱等灾害的影响，严重影响其产量和片［１３～１５］等外植体进行体细胞诱导或不定芽诱导进品质。通过传统育种改良花生的抗病、抗逆性，往往行再生植株的研究。研究表明，来源于成熟种子的受可利用的遗传资源狭窄、优良抗性基因与不良性胚小叶具有取材方便、愈伤诱导率高、再生周期短等［２］状紧密

8、连锁以及种间杂交不亲和等因素制约，育优点，已成为外源基因遗传转化的主要外植体类型种进展缓慢。因此，通过基因工程技术导入外源优［１６］之一。然而，花生胚小叶的再生效率受基因型、异基因是今后花生品种改良的重要途径之一。［１７～２０］激素种类、激素浓度配比等各种因素的影响。花生高效再生体系的建立是基因工程育种成功本研究将以花生胚小叶为外植体，筛选再生能力较的关键，如何提高花生组织培养的再生率一直是研好的基因型，并进一步优化该基因型胚