毛竹种胚试管繁殖的研究

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1、摘要摘要本试验以毛竹种胚为外植体，通过初代培养、继代培养、生根培养及驯化移栽，初步建立了毛竹种胚组织培养体系。在初代培养中，以MS为基本培养基，研究种胚剥离条件、表面消毒条件、暗培养时间及不同细胞分裂素、不同碳源对种胚萌发和生长的影响。在继代培养中，采用单因子或两因子完全随机试验设计筛选毛竹试管苗继代培养最适条件，着重研究细胞分裂素配比、维生素、有机添加物及不同培养基的交替对其增殖的影响。在生根培养中，研究蔗糖、无机盐及生长素对生根的影响。最后对生根苗进行驯化移栽。研究结果表明：1．毛竹种胚接种前种子浸泡或冲水12—16h，活化种胚及软

2、化种皮便于种胚剥离，4周后浸种12h的处理发芽率达90％，优于其他处理。种子浸泡在0．25％的次氯酸钠溶液中，置真空泵内抽滤灭菌5min，污染率10％以内，发芽率达90％。接种后在暗柜中培养，暗培养2d的处理发芽率最优，可达到100％。在含细胞分裂素的培养基中，添加BA和TDZ的处理较其他处理对种胚生长的影响更为显著，BA浓度在O．3．3．0mg·L一，TDZ浓度在0．001．0．1mg·L。范围内利于促进种胚的生长，BA或TDZ浓度过高均会产生毒害。添加不同浓度蔗糖的处理对促进植株生长的作用最为显著，30g-L"‘的蔗糖对植株生长最有

3、利，褐化程度最轻。2．在继代培养基中，BA和TDZ相互作用优于单独使用其中一种，添加BA0．3mg·L一+TDZ0．1mg·L以利于促进增殖及生长。增殖过程中添加O．01mg·L’1的Picloram，有利于促进植株的生长并有效的降低褐化，继代增殖培养基选择BA0．3mg·L～+TDZ0．1mg·L～+Picloram0．01mg·L以+蔗糖30g·L-1+Gelrite4g-Lq较为合适，4周后，增殖系数为2．2，芽的生长旺盛。添加MT或White’s维生素对毛竹增殖影响差异不显著。培养基未添加有机添加物的对照处理优于其他处理。在继代

4、培养基与MS培养基交替培养最利于增殖及生长，增殖系数达到2．7，平均芽长15．0mm，植株生长良好，褐化程度轻。3．低浓度的无机盐或蔗糖均有利于植株根的生长，最适蔗糖浓度为20g．L～，最适无机盐浓度为3／4MS。MS培养集中添加NAA0．1mg·LJ或IBA0．1mg．L-1利于促进植株生根。移栽基质为泥炭：蛭石：珍珠岩=1：l：l，移栽成活率达80％。关键词：毛竹；种胚；试管繁殖摘要ABSTRACTExcisedembryosofaseriesPhyllostachyspubescenswereservedasexplants，an

5、dpreliminarytissueculturesystemformicropropagationwasestablishedthroughprimaryculture，subcultureandtransplantfollowingthehardening．Inprimaryculture，MSbasicmediumWaSappliedonembryoculturedissect，surfacedisinfestations，darkperiodandvariouskindandconcentrationsofcytokines,c

6、arbonsourcestestedembryo-derivedmieropropagation．FactorialtestsweredesignedtOperformexperimentsinordertodetectthesuitableconditionsoneytokines，vitamins，andorganicaddenda．Selectedconditionswereestablishedafterconcentrationsofsugars，macrosaltsofMSsaltsconcentrationsandauxi

7、nsforrootingwereexperimented，followedbyhardeningandtransplanting．Resultsofeachstepwerecarriedoutwithstatisticalanalyses．Experimentalresultsshowedthat：1．Seedsrequiredpre—soakingorinrunningwaterintopwaterfor12~l6k4weekslater,theseedgerminationwithsoaking12hWaSinexcessof90％

8、．DisinfestationsofseedcoatWaSdonein0．25％sodiumhypochloritesolutionwithafewdropsofTween20for5mininavacuu