《生物技术实践》复习课件.ppt

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1、微生物的分离和培养酶的研究与应用DNA和蛋白质技术生物技术与实践一、微生物的培养与分离㈠微生物的培养与分离培养基的配制微生物的分离——纯化大肠杆菌的操作㈡某种微生物数量的测定土壤中分解尿素细菌的分离与计数㈢培养基对微生物的选择作用分解纤维素的微生物的分离㈣利用微生物进行发酵来生产特定的产物果酒、果醋、腐乳的制作㈤发酵过程中亚硝酸盐含量的测定制作泡菜并检测亚硝酸盐含量㈠微生物的培养：1.培养基培养基的种类依据物理性质、化学成分、用途划分培养基的营养碳源、氮源、水、无机盐配制培养基的操作：倒平板与平板倒置制备牛肉膏蛋白胨固体培养

2、基计算（配方比例）称量（各种成分）溶化（琼脂）调整pH灭菌倒平板①②③④2.灭菌与消毒方法及对象灭菌方法：灼烧、干热、高压蒸汽、过滤灭菌法灭菌对象：培养基、培养皿、接种用具等消毒方法：煮沸消毒、巴氏、酒精、过氧乙酸、紫外线消毒的对象：操作台、操作空间、操作者的衣着和双手3.接种纯化大肠杆菌的操作—⑴平板划线法平板划线操作五区划线法倒置培养皿⑵　稀释涂布平板法①系列稀释操作②涂布平板操作：4.培养——恒温培养箱培养：放在培养箱中，适宜恒温、氧气、二氧化碳的含量5.观察——菌落：菌落群体结构特征：菌落的形状、大小、边缘、光泽度、

3、隆起度、透明度等是菌种鉴定重要依据菌落的观察二、某种微生物数量的测定：——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数选择菌种梯度稀释培养菌液稀释涂布接种4.统计菌落数目：样品稀释度足够高时，一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌（不是绝对的）。实验至少要涂布三个平板作为重复组一般选择菌落数在30～300的平板计数每克样品中的菌落数＝平均菌落数÷稀释液的体积×稀释的倍数稀释涂布平板法鉴别培养基—固体选择培养基—液体三、培养基对微生物的选择作用——分解纤维素微生物的分离四、利用微生物进行发酵来生产特定的产物㈠果酒和果醋的制作果酒果醋实验原理

4、酵母菌无氧分解葡萄糖产生酒精醋酸杆菌有氧分解葡萄糖、乙醇产生醋酸实验设计操作过程挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→→醋酸发酵无氧↓1-3周↓有氧10天左右生成果酒生成果醋结果评价成分鉴定3mol/LH2SO43滴、饱和重铬酸钾溶液3滴，酒精与重铬酸钾反应呈现灰绿色或通过嗅味和品尝观察菌膜、嗅味、品尝，检测和比较醋酸发酵前后的pH、显微镜观察。㈡腐乳的制作１.实验原理用豆腐由多种微生物（主要毛霉）参与发酵制成毛霉等微生物产生的以蛋白酶为主各种酶发酵的最佳温度为15～18℃。2.操作条件酒精含量的控制：盐的浓度控制:水分保持在70

5、%以下3.实验设计及操作４.课题成果评价是否完成腐乳的制作腐乳质量的评价影响腐乳质量的因素：菌种和杂菌：杂菌污染则直接影响产品的色、香、味。温度：温度影响菌丝的生长和代谢发酵时间：发酵时间影响生化反应度及生化产物的量调味品：各种酒类、糖类等辅料的多少也对口感有重要影响五、泡菜中亚硝酸盐含量的测定1.实验原理：乳酸菌无氧条件将葡萄糖分解成乳酸。泡菜中微生物将蔬菜中硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐在特定的条件下会转变成致癌物——亚硝胺。用对氨基苯磺酸重氮法测量亚硝酸盐含量（紫红色）：在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸形成重氮化合

6、物，再与N-1-萘基乙二胺偶合，形成紫红色染料与标准显色液比较、定量分析。2.操作步骤腌制泡菜↓制备标准显色液↓制备样品处理液↓比色→结果分析计算腌制条件的控制将坛口用水封好，防止外界空气进入坛中要加一些白酒（白酒可抑制泡菜表面杂菌的生长，是一种调味剂，可增加醇香感）腌制条件的控制：温度、食盐量、腌制时间温度过高、食盐用量不足10％、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。３、亚硝酸盐含量的测定制备样液显色处理标准比色泡菜亚硝酸盐含量（mg/kg）=样品亚硝酸盐含量取

7、样量（40ml滤液）比色亚硝酸含量单位：1μg=10-3mg取样量：0.4×1/2×60/500×40/100=9.6×10-3kg泡菜亚硝酸盐含量的计算观察样品颜色的变化，并与标准显色液比较，找出与标准液最相近的颜色，记录对应的亚硝酸钠含量，并计算。每隔2天测一次，将结果记录下来。4.实验结果分析1号坛2号坛3号坛1月4日0.150.150.151月8日0.600.200.801月12日0.200.100.601月15日0.100.050.201月19日0.100.05020解释数据：腌制后的前6天内，泡菜中的亚硝酸盐含量

8、就可以达到最高峰。由于泡菜在开始腌制时，坛内环境有利于某些硝酸盐还原菌的繁殖，可以促进硝酸盐还原为亚硝酸盐。第9天后泡菜中的亚硝酸盐含量开始有明显下降。随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐的含量又有所下降。乳酸细菌也大量繁殖，对硝酸盐还原菌产生一定的抑制作，使其生长繁殖受到影响。果酒、果醋、