腺苷预适应对心肌的延迟保护研究.doc

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1、腺昔预适应对心肌的延迟保护研究作者：丁家望杨俊李松李稳慧李莉姜玉蓉陈勇【摘要】目的旨在证实ATP敏感性钾通道(KATP)的开放和内源性一氧化氮合成酶(1N0S)表达上调介导了腺昔(ADO)预处理的延迟保护。方法实验动物随机分成4组，对照组：心肌缺血前24h静注生理盐水；ADOA1受体激动剂(CCPA)组：心肌缺血前24h静注CCPA进行药物预处理；格列苯B(Gli)组：心肌缺血前30min静注Gli；CCPA/Gli组：在CCPA组处理的基础上，心肌缺血前30min静注Gli。采用家兔离体工作心脏模型，各组心肌均缺血30min,复灌30min

2、。观察缺血/再灌注前后血流动力学和心功能变化。测定再灌注后冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)、一氧化氮(NO)和心肌组织三磷酸腺<(ATP)含量。用氯化三苯基四氮呼(TTC)判断心肌梗死范围。逆转录酶链聚合法测立lNOSmRNAo结果①CCPA预处理明显改善心肌缺血/再灌注后心功能的恢复，且这种保护作用被Gli阻断；②CCPA预处理减少心肌缺血/再灌注后冠脉流出液LDH、CPK含量，且Gli可抑制这种保护效应；③CCPA预处理可缩小心肌梗死范围，且被Gli阻断；④CCPA预处理可增加心肌组织ATP浓度，Gli可拮抗这种保护作用

3、；⑤CCPA预处理轻度提高心肌组织NO浓度，此效应不受Gli影响；⑥CCPA预处理上调心肌组织iNOS表达，此效应不受Gli拮抗。结论iNOS合成的NO通过激活KATP介导ADO预处理的延迟保护效应。【关键词】腺甘受体；再灌注损伤；延迟保护心肌短暂缺血后不仅具有即刻的保护作用，同时具有延迟保护门）。腺昔（ADO）及其受体参与了预处理的早期保护作用，同时也是延迟保护的重要介质（2）。KATP阻滞剂5轻基癸酸（5hydroxydecanoate,5HD）可以拮抗ADO预处理带來的心肌保护作用〔3）。KATP是单磷酰脂A（MLA）预处理诱导心肌延迟

4、保护的主要内在机制。本文拟利用外源性ADOA1受体激动剂预处理家兔以模拟缺血预处理的心肌延迟保护效应，探讨ADO预处理心肌延迟保护的受体后机制。1材料与方法1.1主要材料与试剂清洁级家兔48只,体重2.5~3.5kg,雌雄不限。ADOA1激动剂2氯6氮环戊烷基ADO（CCPA）（美国Simga公司）；TrizolRNA提取试剂盒（美国Invitrogen公司）；RTPCR按照试剂盒（日本TaKaRa公司）；PCR引物购口Promega公司；其他试剂均为国产分析纯□Newport全自动呼吸机和心输出量检测仪，美国；低温离心机Biofuge22R

5、,德国Heraeus公司；超速离心机，Beckman公司；LKB1251生物发光仪和可见紫外分光光度计，上海分析仪器厂。1.2动物模型耳缘静脉注射戊巴比妥钠(30mg/kg)将兔麻醉后，用肝素500U/kg抗凝。迅速开胸取出心脏置入改良KrebsHenselert液屮，行主动脉和左心房插管，置于灌注架上，以95%02和5%C02饱和的KrebsHenselert液经主动脉彳亍Langendorff逆行灌注，温度37°C,灌注压lOkPao经左心室壁插入压力探头，经压力换能器连接于多道生理记录仪。Langendorff灌注lOmin后转为工作心

6、状态，即经左房灌注(压力为1.995kPa)。平衡灌注15min后，钳闭左心房插管造成全心缺血30min,然后恢复灌注30mino灌注完毕，心脏以及再灌注30mir)时冠脉流出液标木置-70°C保存。1・3实验分组实验动物随机分为4组：对照组(n=12)：心肌缺血/再灌注24h前静注生理盐水0.5ml作为对照；⑵CCPA组(n二12):心肌缺血/再灌注24h前静注CCPA(O.lmg/kg)作为药物预处理；Gli组(n=12)：心肌缺血/再灌注开始前30min静注Gli(0.3mg/kg)；CCPA/Gli组(n=12):CCPA预处理(同第

7、二组)的基础上，在心肌缺血/再灌注开始前30min静注Gli(0.3mg/kg)o灌注结朿后，各组取6只家兔用于心肌梗死范围测定，另6只用于其他观察指标的测定。各组于平衡灌注15min时测定血流动力学指标作为基础值，测定再灌注末相关指标为实验值。1・4观察指标1.4.1血流动力学参数测定心脏跳动稳定后，记录心率(HR)、冠脉流量(CF)、心输出量(CO)、左心室舒张期末压(LVEDP)、左心室收缩期峰压(LVSP)o以停灌前工作心功能基础水平为100%,比较复灌末心功能恢复的百分率。1.4.2心肌梗死范围测定灌注结束后，从左心室导管推注2%〜

8、3%Evans蓝2~3ml,加in后迅速取下心脏，分离缺血区(无蓝色)和非缺血区(蓝色)，将缺血心肌以滤纸吸干，置于天平上称重。再将缺血区水平切成5〜6片，每片厚1