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1、刖吞1材料与方法—4—1・1材料一4一1.2试齐一4一1.3仪器设备-4-1・4试验方法一5-1.4.1技术路线-5-1.4.2菌乖中分离一5-1.4.3菌株培养条件的研究-7-2结果与分析-8-2.1初筛结果-8-2.2复筛结果-9-2.3菌种形态观察-9-2.4单因素试验结果-9-2.4.1碳源对菌株产酶能力的影响-9-2.4.2氮源对菌株产酶能力的影响-10-2.4.3表面活性剂对菌株产酶活性的影响-11-2.4.4发酵培养基初始pH值对菌株产果胶酶的影响....-11-2.4.5发酵温度对菌株产果胶酶的影响-12-2.5正交试验结果一13-3结
2、论-14-参考文献-15-致谢一19一高产果胶酶菌株的筛选摘要：本试验采用平板分离法，从腐烂的水果(苹果、梨、枣、甜瓜、籽瓜)中进行高产果胶酶菌株的筛选。同时，通过单因素试验和正交试验对菌株的培养条件进行了优化。试验结果表明：菌种的最适碳源为葡萄糖，浓度为1.5%；最适氮源为蛋白腺，浓度为0.6%；最佳表面活性剂为吐温-60,浓度为0.01%；最适pH值为3.8；最适发酵温度为43°CO在此条件下菌株的产酶能力可以达到10758u/.mL。关键词：果胶酶，筛选，培养条件优化・、八—A—刖B果胶酶(pectinases)是指能分解果胶质的多种酶的总称，不
3、同来源的果胶酶其特点也不同，微生物来源的果胶酶主要有聚半乳糖醛酸酶(PG),聚半乳糖醛酸裂解酶(PGL)、聚甲基半乳糖醛酸裂解酶(PMGL)和果胶酯酶(PE)Cl'oPG在果胶酶系中发现较早，它可以水解D-半乳糖醛酸-1,4糖背键，产物为单半乳糖醛酸和二半乳糖醛酸；PGL通过切断果胶分子-1,4糖昔键，生成具有不饱和键的半乳糖醛酸酯；PMGL可以切断果胶分子-1,4糖昔键，产物为2〜8个糖醛酸单位的不饱和的甲基半乳糖酸低聚物;PE能够使果胶中的甲酯水解，生成果胶酸和甲醇⑵。产果胶酶的菌种一般可以从腐烂的果蔬以及果园泥土中的微生物中利用果胶为唯一碳源的分
4、离培养基中筛选出来。野生菌株的酶活力往往很低，必须对其进行诱变及发酵条件的优化等以改善菌株的产酶性能。果胶酶的工业化生产均采用微生物发酵方法进行。产生果胶酶的微生物如表1所示⑶。表1常用产果胶酶菌种微生物产果胶酶菌属霉菌Aspergillus^Penicilliuiii、Rhizopus、Fusarium纟田菌Erwinia、Pseudomonas>Bacillus、Clostridiuni酵母Trichosporm^KIuyveromyces>Saccharomyces>Aureobasidium商品酶制剂的生产菌主要是一些真菌。包括Aspergil
5、lusNiger,Rhizopusoryzae,Rhizomucornieihei等。Reddy(1997)概括了曲霉属中产果胶酶的一些菌种，主要有A.flavus,A.niger,A.terreus,A.sydowii等。其中黑曲霉是国际公认的安全菌株，它的代谢产物可以直接应用于食品⑷。果胶酶在工业中的应用十分广泛，主要集中在果汁果酒的澄清、果蔬汁的提取皈、对水果和蔬菜进行浸解、液化以生产单细胞果汁和菜汁、果实脱皮、木材防腐、棉织物精炼加工等方面⑹。国内对果胶酶的研究始于20世纪60年代。八十年代以來我国学者对果胶酶菌种选育进行了广泛的研究。田英华等
6、选育了一株高产果胶酶的黑曲霉突变株HYA4,在优化的发酵条件下酶活力达1285U/gmo全桂静等利用平板菌落法，从腐烂的南果梨样品中分离筛选得到果胶酶高产菌株As2,果胶酶活性达到6635U/g干曲⑷。Albert等人利用不同真菌之间的协同效应将Aspergillusniger和Fusariummoniliforme进行混合培养，产生的果胶酶的活性可以达到1,041.6units/gdryweight）,是单独培养Aspergillusniger的1.7倍⑼。试验采用平板分离法，从腐烂的水果（苹果、梨、枣、甜瓜、籽瓜）中进行高产果胶酶菌株的筛选。同时，
7、通过单因素试验和正交试验对菌株的培养条件进行了优化，旨在为降低企业生产成本，实现果胶酶的国产化提供一定的技术支撑。1材料与方法1.1材料苹果、梨、枣、甜瓜、籽瓜：市售。1.2试剂果胶（美国sigma公司），硝酸镀，硫酸钠，硫酸镁，氯化钾，硫酸铁，磷酸氢二钾，硝酸钠，牛肉膏，蛋白陈，琼脂，可溶性淀粉，硫代硫酸钠，碘，碘化钾，可溶性淀粉，硫酸镀，马铃薯，蔗糖，葡萄糖等。1.3仪器设备微量移液器（Finnpipette,上海雷勃分析仪器有限公司），摇床（SHA-C,金坛市恒丰仪器厂），高压灭菌锅（YX-280B型，上海绿宇精密仪器制造有限公司），电磁炉，水浴
8、锅，烧杯，试管，培养皿，接种针，碘量瓶，酸式滴定管等。1・4试验方法1・4・1技术路线釆样f富
