常用菌悬液的制备、保存及使用方法.doc

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1、常用菌悬液的制备、保存及使用方法 摘要:常用菌悬液的制备、保存及使用方法一、常用试验用菌种的生物学特征（1）枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]形态与染色：菌体细短棒状，单个或成链状，两端半圆...常用菌悬液的制备、保存及使用方法一、常用试验用菌种的生物学特征（1）枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]形态与染色：菌体细短棒状，单个或成链状，两端半圆形，染色均匀，芽孢椭圆形或圆柱形，位于菌体中央，革兰氏染色阳性，能运动。培养特性：营养琼脂平板：菌落表面粗糙，圆形，灰黄色，边缘锯齿状，分离时应挑选粗糙形菌落。普通肉汤培养基：呈少量浑浊并产生沉淀，在液体表面形成皱状厚膜粘附于

2、试管壁上。最适宜培养温度30~37℃，生长温度范围：15~35℃，兼性厌氧或需氧。抵抗力：菌体湿热55℃1小时被杀死，芽孢100℃3小时或120℃40分钟被杀死。（2）铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]形态与染色：革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。培养特性：本菌为专性需氧菌，生长温度范围25~42℃，最适生长温度为25~30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等。在血平板上会有透明溶血环。（3

3、）白色念珠菌[CMCC(F)98001]形态与染色：本菌细胞呈圆形或卵圆形，很象酵母菌，直径3～6μm，比葡萄球菌大5～6倍，革兰阳性，但着色不均匀。培养特性：本菌在血琼脂或沙保氏琼脂上，37℃或室温孵育2～3日后，生成灰白乳酪样菌落，涂片镜检，可看到表层为卵圆形芽生细胞，底层有较多假菌丝。（4）金黄葡萄球菌[CMCC(B)26003]形态与染色：圆球形排列成典型的葡萄串状，营养琼脂平板培养多呈短链状或双球状，无鞭毛，不能动，不产生芽孢，革兰氏染色阳性。培养特性：在28~38℃生长较好，pH生长范围为4.5~9.8，pH7.4左右生长最好。平板分离时应挑选光滑菌落。（5）大肠埃

4、希菌[CMCC(B)44102]形态与染色：短形杆菌，两端钝圆，无芽孢，革兰氏染色为阴性。培养特性：需氧菌，也兼性厌氧。二、检定菌的基本要求（1）显示临床特点，对抗生素主要组分敏感，对杂质，降压物质及毒性物质无作用或作用很低。（2）灵敏、稳定，抑菌圈边缘清晰，测定误差小。（3）易于培养、保存，又无致病性。（4）与其它国家药典的试验用菌最好一致，便于单位统一。（5）常用菌悬液制备时所用溶剂、保存方法及使用期限名称所用溶剂保存方法使用期限枯草芽孢杆菌灭菌水或0.9%灭菌生理盐水4~8℃冰箱保存1个月铜绿假单胞菌灭菌水或0.9%灭菌生理盐水4~8℃冰箱保存半个月金黄葡萄球菌灭菌水或0

5、.9%灭菌生理盐水4~8℃冰箱保存3-7天大肠埃希菌灭菌水或0.9%灭菌生理盐水4~8℃冰箱保存7天白色念珠菌灭菌水或0.9%灭菌生理盐水4~8℃冰箱保存半个月三、菌悬液浓度的简单确定法：麦氏比浊法麦氏比浊管是McFarland发明的一种用于微生物比浊的不同浊度的标准浊度管。具体的配制方法是根据硫酸和氯化钡的比例来定的，有表可查，这样不同比例生成的硫酸钡沉淀的浓度不同，且都有定值。麦氏比浊管的配比如下：管号(McFarland)0.5123450.25%BaCl2 (ml)0.20.40.81.21.62.01%H2SO4 (ml)9.89.69.28.88.48.0菌液浓度(

6、×108/ml)13691215操作方法：（1）轻摇标准试管。（2）无菌操作将被测定的肉汤培养物加到与标准管相同直径（大小）的无菌试管中。（3）以无菌操作向被测定试管加入无菌生理盐水，直到浓度与所要求的标准管的浓度相同。使用技巧：（1）直接用眼睛看（需要经验，误差较大）。（2）找张白纸，打上平行直线，然后看（如图示，利用光在不同浓度液体折射不同）。 注意事项：（1）测定好的细菌，最好做一下梯度稀释涂布计数。（2）此浓度是对应的大肠杆菌的浓度，如果是其他细菌，会有一定的差别。（3）此种方法测定的准确性不是很高，如果是对细菌数量要求较精确的，请用紫外分光光度计。