布病试管凝集试验(人畜检测法相同).doc

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1、布病试管凝集试验（人畜检测方法相同）一、实验前准备1、试管的准备①把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟，浸泡后用试管刷将其刷干净。先用自来水冲洗10遍，再用去离子水冲洗1遍②试管冲洗干净后倒置于篮子中，等水沥干后置干燥箱中，160℃干燥3个小时（整个干燥过程需要5——6个小时）。③实验前要配置0.5%的石炭酸生理盐水实验前要配置的石炭酸生理盐水配置方法：称取0.5克石炭酸加入100ml的生理盐水中121℃高压30分钟。2、试剂的准备①标准抗原：按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液作1:20(工作浓度)稀释。②标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。③标准

2、阴性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3、被检血清①按常规方法采血分离血清血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。②运送和保存血清样品防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。二、试验操作过程1、确定被检血清的稀释度牛、马、骆驼稀释用1:50、1:100、1:200、1:400（4个稀释度）；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50、1:100、1:200（4个稀释度)。大规模检疫时也可用2个稀释度，牛、马、骆驼用1:50、1:100；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50，为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。

3、2、稀释被检血清：猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释①每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第I管加1.15mL稀释液，第2-4管各加人0.5mL稀释液。②取被检血清0.1mL，加人第1管，充分混匀后吸弃0.25mL。③从第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5mL至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去0.5mL，稀释完毕。④从第1至第4管的血清稀释度分别为1：12.5,1：25,1：50,1：100。3、加抗原将0.5mL抗原抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1:25,1:50,1:100,

4、1：200；牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1：50,1：100,1：200,1:400。各反应管反应总量为1mL。4、设立对照：每次试验都应设立下列对照。①阴性血清对照阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同②阳性血清对照阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度，加抗原的方法与被检血清同。③抗原对照在0.5mL稀释液中，加0.5mL抗原（1：20)5、比浊管的配置每次试验均须配制比浊管，作为判定凝集反应程度的依据。先将抗原(1:20)用等量稀释液作一倍稀释，然后按表1配制比浊管配制比浊管。表1比浊管的配制管号1:40稀释抗原ml稀释液ml清亮度%记录标记10.001.0

5、0100++++20.250.7575+++30.500.5050++40.750.2525+51.000.000-6、感作所有试验管充分震荡后，置37℃温箱20小时7、结果判断确定每份被检血清效价：比照比浊管判读，出现“++”以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。①结果判定当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(一)，阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度，则证明试验成立，可以判定。否则，试验应重做。②牛、马和骆驼于1:10。血清稀释度，猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释度出现“++”以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。三、试验后的处理1、试管的处理把所用试

6、管必须高压处理（121℃高压30分钟），然后用自来水彻底洗涮干，再用去离子水冲洗，后放置框中沥干，干燥（160℃干燥3个小时），保存备用。2、配置好而未用完的抗原及其盛装其瓶子的处理瓶子连其抗原一同高压灭菌（121℃高压30分钟），后清洗干净以备用。3、试管架的处理把试管架上带有样品标记的符号用无水乙醇彻底清除掉，后用自来水把试管架冲洗干净，晾干、保存备用。