布氏杆菌病试管凝集试验作业指导书

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1、作业指导书第二章第1页共3页布氏杆菌病试管凝集试验作业指导书SQSYK-ZY2-009-1.0第一版第0次修改起草人：2011年04月日颁布、实施依据标准SN/T1090—20021适用范围适用于羊种、牛种、和猪种布氏杆菌感染家畜的检疫。2试剂和材料2.1试剂2.1.1试验用蒸馏水为GB/T6682中的三级水。2.1.2稀释液：0.5%石碳酸生理盐水（含0.5%石碳酸、0.85%氯化钠溶液）。检验羊血清时用含0.5%石碳酸的10%盐溶液（含0.5%石碳酸、10%氯化钠溶液）。2.1.3标准抗原：按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液做1：20稀释。2.1.4标准阳性血清：冻干品，使用前用蒸

2、馏水溶解至规定容积。2.1.5标准阴性血清：冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。2.2材料2.2.1试管架2.2.2玻璃试管：规格为13mm×100mm，圆底，洁净。2.2.3微量移液器。2.2.4可调连续加样器。2.3被检血清2.3.1按常规方法采血分离血清。血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。3操作方法3.1确定被检血清的稀释度牛、马、骆驼稀释用1：50、1：100、1：200、1：400（4个稀释度）；猪、山羊、绵羊和狗用1：25、1：50、1：100、1：200（4个稀释度）。大规模时也可用2个稀释度，即牛、马、骆驼稀释用1：50、1：100；猪、山羊、绵羊和狗用1

3、：25、1：50。为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。3.2稀释被检血清3.2.1猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释3.2.1.1每份被检血清用4支试管,标记检验编号后第1管加1.15ml稀释液,第2-4管各加入0.5ml稀释液。3.2.1.2取被检血清0.1ml,加入第1管,充分混匀后吸弃0.25ml。3.2.1.3从第1管中吸取0.5ml加入到第2管,混合均匀后,再从第2管吸取0.5ML至第3管,如此倍比稀释至第4管,从第4管弃去0.5ml,稀释完毕。3.2.1.4从第1至第4管的血清稀释度分别为1:12.5、1:25、1:50、1:100。3.2.2牛、马和骆驼血清的稀释作业指导书第二章第

4、2页共3页布氏杆菌病试管凝集试验作业指导书SQSYK-ZY2-009-1.0第一版第0次修改起草人：2011年04月日颁布、实施牛、马和骆驼血清的稀释方法与3.2.1基本一致,差异是第1管加1.2ml稀释液和50被检血清。3.3加抗原将0.5ml抗原(1:20)加入巳稀释好的各血清管中,并振摇均匀,猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1:25、1:50、1:100、1:200、1:400。各反应管反应总量为1ml。3.3设立对照每次试验都应设立下列对照。3.3.1阴性血清对照阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同。3.3.2阳性血清对照阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度,加抗原的方法与被检血清

5、同。3.3.3抗原对照在0.5ml稀释液中,加0.5ml抗原(1:20)。3.5配制比浊管每次试验均须配制比浊管,作为判定凝聚反应程度的依据,先将抗原(1:20)用等量稀释液作一倍稀释,然后按表1配制比浊管。表1比浊管的配制试管号12345抗原稀释液1：400．5%石炭酸生理盐水清亮度1%凝集度标记1.0000-0.750.2525+0.500.5050++0.250.7575+++01.00100++++注:++++完全凝集,菌体100%下沉,上层液体100%清亮；+++几乎完全凝集，上层液体75%清亮；++凝集很显著，液体50%清亮；+有沉淀，液体25%清亮；-无沉淀，液体不清亮。3.6

6、感作所有试验管充分震荡后,置37℃温箱感作20ｈ。4．判定4.1确定每份被检血清效价比照比浊管判读,出现++以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。4.2结果判定当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(-),阳性血清的凝集价达到其标准效价±1个滴度,则证明试验成立,可以判定。否则，试验应重做。4.2.1牛、马和骆驼于1:100血清稀释度,猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释作业指导书第二章第3页共3页布氏杆菌病试管凝集试验作业指导书SQSYK-ZY2-009-1.0第一版第0次修改起草人：2011年04月日颁布、实施度出现“++”以上的凝集现象时,被检血清判定为阳性反应。4.2.2需要采用国际

7、凝集单位表示试验结果时,可按照附录A中的换算公式换算成国际凝集单位。