多聚酶链式反应扩增DNA片段演示文稿.ppt

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1、多聚酶链式反应扩增DNA片断点此播放教学视频点此播放教学视频点此播放教学视频细胞内和细胞外DNA复制环境的区别体内DNA的复制体外的模拟模板（母链）细胞内源外源加入引物引物合成酶外源加入底物dNTP细胞内源外源加入聚合酶细胞内源外源加入反应环境细胞内环境缓冲液点此播放教学视频PCR仪点此播放教学视频微量离心管微量移液器点此播放教学视频靶序列靶序列PCR循环第一步：加热变性点此播放教学视频靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’PCR循环第二步：引物与靶序列退火靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3

2、’5’3’3’TaqDNA聚合酶PCR循环第三步：引物延伸靶序列靶序列第1个PCR循环完成后：得到两个拷贝的靶序列循环次数DNA数量122438201,048,576301,073,741,8243、30次循环后靶序列扩增的数量循环数变性复性延伸第一次94°C，10min－－30次９4℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次72℃，10min点此播放教学视频④计算DNA含量（g）＝50x(260nm的读数）x稀释倍数50：1g/ml的DNA在厚度为1cm比色杯中的吸光值为0.02点此播放教学视频比色杯点此

3、播放教学视频葡萄RS基因的RT-PCR扩增葡萄RS基因的RT-PCR扩增图谱M.DNAMarker2000；1.RS基因约1300bp点此播放教学视频点此播放教学视频点此播放教学视频实验小结PCR仪加热使（）变性,复性使引物与模板DNA（）,延伸需将反应温度升至中温(),在（）的作用下,以（）为原料,以（）为复制的起点,合成新链。如此重复改变反应温度,经（）三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍;将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灯照射

4、下肉眼能见到扩增特异区段的DNA带。模板互补Taq聚合酶四种脱氧核苷酸引物变性、复性和延伸72℃点此播放教学视频