维生素c含量测定方法.ppt

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1、维生素C含量测定方法综述摘要目前研究维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。关键词维生素C滴定法高效液相色谱法概述维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。测定维生

2、素C常用的方法有2,6-二氯靛酚滴定法、苯肼比色法、荧光法及高效液相色谱法等。2,6-二氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，该法简便，也较灵敏，但特异性差，样品中的其他还原性物质会干扰测定，使测定值偏高，且对深色样液滴定终点不易辨别。苯肼比色法和荧光法测得的都是抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。高效液相色谱法可以同时测得抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的含量，具有干扰少、准确度高、重现性好、灵敏、简便、快速等优点，是上述几种方法中最先进、最可靠的方法。维生素C的结构式维生素C：六碳的多羟基内酯原理染料2,6-二氯靛酚在酸性溶液中呈粉红色（在中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原型抗坏

3、血酸还原后颜色消失。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中还原型抗坏血酸含量成正比。1滴定法测定维生素C2，6一二氯靛酚法2，6一二氯靛酚法试剂1%的乙二酸溶液，2%的乙二酸溶液，1%淀粉溶液，6%碘化钾溶液。抗坏血酸标准溶液：准确称取20mg抗坏血酸，溶于1%的乙二酸中，并稀释至100mL，置冰箱中保存。用时取出5mL，置于50mL容量瓶中，用1%乙二酸溶液定容，配成0.02mg/mL的标准溶液。标定：吸取此标准液5mL于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5mL，1%淀粉溶液3滴，以0.

4、001mol/L碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。2，6一二氯靛酚法计算：式中：c——抗坏血酸标准溶液的浓度mg/mL；V1——滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，mL；V2——滴定时所取抗坏血酸的体积，mL；0.088——1mL0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/mL。2，6一二氯靛酚法试剂0.000167mol/L碘酸钾标准溶液：精确称取干燥的碘酸钾0.3567g，用水稀释至100mL，取出1mL，用水稀至100mL，此溶液1mL相当于抗坏血酸0.088mg。2,6-二氯靛酚溶液：称取2,6-二氯靛酚50mg，溶于200

5、mL含有52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。次日过滤于250mL棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。每周标定1次。标定：取5mL已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1%乙二酸溶液5mL，摇匀，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色，在15s内不褪色即为终点。2，6一二氯靛酚法计算：式中：T——每毫升染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/mL；c——抗坏血酸的浓度，mg/mL；V1——抗坏血酸标准溶液的体积，mL；V2——消耗2,6-二氯靛酚的体积，mL。2，6一二氯靛酚法测定步骤提取鲜样制备：称100g鲜样，加等量的2%乙二酸溶液，倒入组织捣碎机中打成匀浆

6、。取10~40g匀浆（含抗坏血酸1~2mg）于100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀释至刻度，混合均匀。干样制备：称1~4g干样（含1~2mg抗坏血酸）放入研钵内，加1%乙二酸溶液磨成匀浆，倒入100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀释至刻度。过滤上述样液，不易过滤的可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤备用。2，6一二氯靛酚法测定步骤滴定吸取5~10mL滤液，置于50mL三角瓶中，快速用2，6-二氯靛酚溶液滴定，直到红色不能立即消失，而后再尽快地一滴一滴地加入（样品中可能存在其他还原性杂质，但一般杂质还原染料的速度均比抗坏血酸慢），以呈现的粉红色在15s内不消失为终点。同时做

7、空白实验。2，6一二氯靛酚法结果计算式中：X——样品中抗坏血酸含量，mg/100g；m——滴定时所取溶液中含有样品的质量，g；T——1mL染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量，mg/mL；V——滴定样液时消耗染料的体积，mL；V0——滴定空白时消耗染料的体积，mL。2，6一二氯靛酚法注意事项（1）所有试剂最好用重蒸馏水配制。（2）样品采取后，应浸泡在已知量的2%乙二酸溶液中，以防止维生素C氧化损失。测定时整个操作过程要迅速，防止抗坏血酸被氧化。（3）若测动物性样品，需用10%三氯乙酸代替2%乙二酸溶液提取维生素C。（4）若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白

8、陶土脱色后