专题3植物的组织培养.doc

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1、专题3植物的组织培养技术一、菊花的组织培养（联系必修一P119《细胞全能性》）1、相关概念：分化：在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性的差异的过程。脱（去）分化：高度分化的植物组织或器官产生愈伤组织的过程（是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程）。再分化：指离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新分化，形成另一种或儿种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株的过程。愈伤组织：细胞排列疏松而无规则，高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。胚状体：离体培养条件下所形

2、成的胚状类似物。2、原理：细胞全能性3、植株形成过程：（脱分化）（再分化）外植体愈伤组织胚状体植株4、影响植物组织培养的因素1）、不同的植物组织（烟草、胡萝卜组织较容易培养；枸杞愈伤组织的芽诱导较难）；2）、同一种植物的年龄、保存时间的长短（选用未开花植株的茎上部新萌生的侧枝（生长旺盛的嫩枝））；3）、离体；4）、营养：大量元素、微量元素、有机物（甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖）、植物激素（菊花茎段组织培养比较容易，可以不添加植物激素）；5）、PH（5.8左右）、温度（18—22°C）、光照（每日日光照射12小时）；6）、无菌：灭菌、消毒、无菌操作5、实验操作过程制

3、备MS固体培养基：配制各种母液、配制培养基（固体）、灭菌（高压蒸汽灭菌）外植体消毒：流水冲洗〜少许洗衣粉软刷刷洗一流水冲洗（20min）->无菌吸水纸—70%酒精（摇动2—3次、6—7s）f无菌水冲洗（洗去酒精）一无菌吸水纸->0.1%氯化汞溶液（l-2min）-无菌水清洗3次（漂净清毒液）接种：防止污染的措施一一工作台用70%的酒精擦拭；操作在酒精灯火焰旁进行；接种器械用火焰灼烧灭菌；封口膜攥于右手心；瓶口旋转通过火焰。切成0.5-lcm小段；接种茎段时不要倒插；接种后将封口膜重新扎好。培养：无菌箱中培养，控制温度和光照条件。移栽：移栽前先打开封口膜让试管苗在培养间

4、生长几日；栽培：6、生长素与细胞分裂素的使用先后顺序、用量比例关系对分化的影响（P33与P36）使用顺序实验结果生长素/细胞分裂素实验结果先生长素，后细胞分裂素较高先细胞分裂素，后生长索较低同时使用适中7、常用植物激素类似物植物激素生长素2,4—D；NAA；IPAIAA；PAA；IBA；细胞分裂素KT；6—BA；ZT赤霉素GA3;8、各类培养基配方（详见P36——激素含量）诱导愈伤组织：诱导丛芽：诱导生根:二.月季的花药培养（联系必修二的单倍体育种）1、原理：细胞（生殖细胞）全能性2、被子植物的花粉发育过程（详见P37-P38）：小泡子母细胞一小泡子四分体时期（4个小

5、泡子）一单核居中期一单核靠边期一双核期（花粉粒）。（每一花粉粒中含两个精子）3、产生花粉植株的途径:（脱分化）（分化）花药中的花粉胚状体丛芽（诱导）（脱分化）（再分化）生根移栽花药中的花粉愈伤组织丛芽4、影响花药培养的因素（材料的选择与培养基的组成是主要因索）1）、植物种类2）、初花期的花（五月初到五月中旬）3）、单核期，细胞核由中央移向细胞一侧时期的花粉（该期花粉对离体刺激敏感容易产生愈伤组织或胚状体;此前的花粉质地幼嫩、极易破破碎；此后的花粉花瓣松动给材料清毒带来困难。）4）、完全未开放的花蕾（开放的花蕾易被微生物感染）5）、亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、

6、接种密度5、实验操作过程1）、材料的选择：通过镜检确定花粉是否处于适宜的发育期%1醋酸洋红法（常用方法）%1焙花青一絡矶法（细胞核不易着色时用的方法）2）、材料的消奉70%酒精（30s）-无菌水〜无菌吸水纸->0.1%氯化汞（1%次氯酸钙或饱和漂白粉）溶液-*无菌水3）、接种：消毒后的花蕾，在无菌条件下除去萼片和花瓣，立即将花药接种到培养基；剥离花药时要尽量不损伤花药（避免从受伤部位产生愈伤组织）；彻底去除花丝（与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成）；每瓶接种花药7—10个；25°C左右、不需要光照、幼小植株形成后才需要光照。4）、培养：20-30天后花药开裂

7、长出愈伤组织或释放胚状体；如是愈伤组织则要转移到分化培养基上，进一步分化出再生植株；如是胚状体则一个花药会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开移植到新的培养基上，否则植株将很难分开。对培养出来的花粉植株进行染色体倍性鉴定和筛选（因为通过愈伤组织形成的花粉植株常常会出现染色体倍性的变化）。5）、移栽：6）、栽培:6、诱导培养基配方（详见P4—激素含量）诱导丛芽或胚状体：MS培养基、GA、IBA、BA诱导生根：MS培养基、IAA