【精品】水稻条纹病毒与介体灰飞虱互作的相关研究.doc

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1、题记：谨以此文献给奋战在一线工作的同志们，向你们致敬!奋斗吧！努力吧！时间就是金钱，效率就是生命！水稻条纹病毒与介体灰飞虱互作的相关研究周益军、程兆榜、熊如意、季英华江苏省农业科学院植物保护研究所南京2100141•田间灰飞虱带毒研究为了明确灰飞虱対水稻条纹病毒（RSV）经卵传播的特性，利用Dot-ELISA方法分析了來白不同地区、不同发病□□块、不同世代、不同龄次、不同家系及英后代的灰飞虱带毒情况。结果表明：不同地区灰飞观带毒率差异显著，轻病区带毒率明显偏低；采集样品□□块水稻发病率与灰飞虱带毒率无必然相

2、关性，带毒率高低可能与原初侵入灰飞虱种群带毒情况有关；越冬代、第一代和第二代灰飞虱带毒率呈“V”字型结构，暗示［II间条件下灰飞虱带毒状况存在自然衰减和累积效应；灰飞虱体内带毒浓度随着龄次的増长血提高，低龄虫带毒浓度较低训能是其与无毒虫存活率相似的重要原因。2•灰飞虱与RSV亲和性互作关系及其分子标记研究对不同灰飞虱家系的带毒率进行追踪观察并对部分家系后代进行重新纯化和进一-步追踪结果显示，灰飞虱与RSV的互作关系可分为4个类群：HA,高亲和性,灰飞虱可以稳定地经卵传播RSV；MA,中亲和性,灰飞虱可以在一

3、段时期内稳定经卵传播RSV,随着繁殖代次的增加其带毒率下降较快，重新纯化后短期内可以完全恢复；LA,低亲和性，灰飞虱可以获得RSV,但不能稳定经卵传播RSV；NA,非亲和性，灰飞虱不能获得和携带RSV0这是首次对灰飞虱一RSV的互作关系进行明确分类.通过单雌产卵的方法，利用试剂盒检测灰飞虱亲本及英后代的带毒情况，対江苏13个具、市［II间灰飞虱进行亲和性群体筛选试验，英中灌云、高邮、建湖、武进等地未筛选到高带毒亲和性群体，莫他地区均筛选到高带毒亲和性群体，英中洪泽和盐都等地占有比例较高，分别为占自然种群的1

4、5.29%,17.39%；占当地带毒群体的52%和50%。该亲和群体在带毒群体和自然种群中占有一定比例，是病害流行不可缺少的因素。在构建的高亲和性和非亲和性灰飞虱群体屮，应用RAPD和SPAR分别扩增出l200bp和900bp可能作为RSV与灰飞虱亲和性相关分子标记的特异性条带。3.RSV对灰飞虱生活力的影响利用同一家系的高亲和性灰飞虱的无毒虫与带毒虫，将亲代灰飞虱纽合成四个纽合：纽合1带毒雌虫X带毒雄虫：纽合2带毒雌虫x无毒雄虫；纽合3无毒雌虫x带毒雄虫；纽•合4无毒雌虫x无毒雄虫作为对照。研究发现F"弋

5、带毒情况只与雌虫有关，雌虫带毒则后代带毒率为100%。携带RSV的灰飞虱，其对F1代产卵量无明显影响，而对孵化力有影响，四个组合中孵化出的一龄幼虫数,组合4＞组合2＞组合1与组合3,组合1与3间无显著差异,从中可以看出，亲代带毒减弱后代的孵化力，且推测带毒雄虫对孵化力的影响更大一些。同时研究显示，携带RSV的灰飞虱，其孵化历期延长，并且眄代幼虫和成虫成活率相对无毒虫组合有所提髙。4.RSV在介体灰飞虱体内亚细胞定位及卵传机制初步研究应用超薄切片和免疫金标记电镜技术分析了RSV在灰飞虱生殖器官及中肠的分布。观

6、察结果表明，在卵巢的滤泡细胞中集中分布了大量病毒粒子：在卵壳、卵内以及中肠细胞上有高密度的免疫金颗粒标记。上述研究结果暗示卵売中的病毒粒子来自于卵细胞周围的滤泡细胞，随着滤泡细胞分泌卵売蛋白时进入卵売这一过程。5・RSV编码蛋白在灰飞虱体内的检测及其与CP互作研究检测灰飞虱体内山水稻条纹病毒（RSV）编码的外壳蛋白CP、病害特异性蛋白SP,以及非结构蛋白NS2、NS3和NSvc45种蛋白以及病毒粒子（CP）与SP、NS2、NS3、NSvc4的互作，为进一步研究水稻条纹病毒与其介体昆虫互作提供有用信息。本研究

7、提取了高带毒灰飞虱（Q家系）总蛋白，用免疫方法检测了昆虫体内CP、SP、NS2、NS3和NSvc45种重要蛋白的表达以及病毒粒子（CP）与SP、NS2、NS3、NSvc4的互作。结果表明在带毒灰飞虱体内以上5种蛋白都能检测到,而且CP含量最高,NSvc4、SP、NS3、NS2含量依次降低；用体外原核表达后纯化的蛋白进行了RSV病毒粒子（CP）与SP、NS2、NS3、NSvc4的互作实验，实验结果表明病毒粒子（CP）与SP、NSvc4之间存在互作关系。检测结果为灰飞虱作为RSV的昆虫寄主并II可以在其体内增殖

8、的结论提供了支持，表达差异表明病毒编码蛋白在介体灰飞虱体内可能存在着一定的协调关系；CP与SP的互作为前人关于CP与SP可能共同作用于叶绿体进而影响症状的严重度的报道又提供了一个新的证据，CP与NSvc4之间存在互作关系，也为NSvc4可能作为运动蛋白诱导病毒在胞间运动需要CP的辅助提供了佐证。同吋利用双向电泳筛选到灰飞虱体内存在一个60KD、pl=6.7可以与RSV发生特异性体外结合，该蛋白与广泛存在于传毒昆虫