灰飞虱唾液腺中与水稻条纹叶枯病毒（rsv）传播相关蛋白的研究

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1、’、Ｉ围，９分类巧卢学号（＇．Ｖ聲４叫大！、、＾（学术型）ｆＩ＾＼灰飞動唾液腺中与水稻条纹叶枯病毒ＲＳＶ）＼（ｒ｜．、传播相关蛋白的研究种＼－－Ｖ尸’辱陈艳指导教师姓名；刘著教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９ｆ申请学位级别：硕壬学科专业名称：植物保护。论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期；２０１５年５月学位授予单位日期：２０１５年６月巧；扬州大学学位授予；＾．答辩委员会主席：霍保平、＾ｔＪ占Ｓ＼资

2、助项目：国家自然科学基金项目３０９７１９１４３１１７１８４２（；）ＭＡＳＴＥＲＢ巧ＳＥＲＴＡＴＩＯＮＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＰｒｏ化ｉｎｓａｓｓｏｃｉａｔｅ！ｗｉｔｈｒｉｃｅｓｔｒｉｅｖｉｒｕｓｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｐｓａｌｉｖａｒｙｌａｎｄｏｆＬａｏｄｅｌｈａｘｓｔｒｉａｔｅｌｌｕｓｇｐＭａｓｔｅｒＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＣｈｅｎＹａｎＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏ化ｓｓｏｒＬｉｕＦａｎｐｇＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖ

3、ｅｒｓｉｔｙＹａｎｚｈｏｕ２２５００９ＪｉａｎｓｕＣｈｉｎａｇ，ｇ，Ａｒｉｌ２０巧ｐ，Ｉ陈艳：灰飞風唾液腺与ＲＳＶ传播相关蛋白研究摘要’灰飞頭Ｚｏｏ成／如ｏｘｓ／ｒｚｆｌｆｋＷｗ（半翅目飞諷科）是亚洲地区水稻上的重要害虫。它不仅刺吸水稻汁液造成危害，更重要的是传播水稻条纹叶枯病奉（Ｒｉｃｅｓｒｉｐｅｖｉｍｓ，ＲＳＶ）造成水稻条纹叶枯病的流斤。ＲＳＶ是纤细病毒属代表成员，由灰飞ＥＷ循回增殖型方式经卵传播。介体灰飞武从感染植株吸食获毒后，ＲＳＶ从肠壁内腔扩散到血淋己

4、及其它组织，最后一到达唾液腺。道屏，在介体昆虫取食时又被传至植株唾液腺是ＲＳＶ传播需要克服的最后障－，而ＲＳＶ克服唾液腺屏障的机制缺乏研究。前期的研究发现，带毒灰飞風唾液腺中ａ－ＡＴＰ－－－亚基合酶（ＡＴＰｓｙｎｔｈａｓｅｓｕｂｕｎｉｔａｌｐｈａ）、微管蛋白ａ２（Ｔｕｂｕｌｉｎａｌｐｈａ２）、苹果酸脱－ｍａ氨酶（ＮＡＤＰｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｉｃｅｎｚｙｍｅ）、线粒体内膜移位酶（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｉｍｐｏｒｔｉｎｎｅｒ－ｍｍｂ－６０Ｕｂｉｉｔｅｒａｎｅｔｒａｎｓｌｏ

5、ｃａｓｅ）及泛素ｓ核糖体Ｌ４０前体（ｉｎ６０ＳｒｉｂｏｓｏｔｎａｌｒｏｔｅｉｎＬ４０ｑｕｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）等５个蛋白的表达水平显著高于无毒灰飞風唾液腺。本论文研究了苹果酸脱暑ｐ酿－６化核Ｌ４０３、线粒体内膜移位酶及泛素糖体前体等个唾液腺差异蛋白的氨基酸全长序－－－ＲＮＡ干扰研究了ＡＴＰ合酶－列及基因表达ａ亚基、微管蛋白ａ２、线粒体内膜移位，并用酶基因对ＲＳＶ传播的影响。主要结果如下：（１）利用克隆与ＲＡＣＥ技术，从带ＲＳＶ的灰飞風体内成功扩增出２０６０ｂｐ的苹果酸脱－ｓ氨

6、酶、６６１ｂｐ线粒体内膜移位酶及１１６７ｂｐ的泛素６０核糖体Ｌ４０前体的的核巧酸全长序列。将全长核昔酸序列提交到ＮＣＢＩ的ＧｅｎＢａｎｋ数据库中，分别命名为ＬｓＮＡＤＰ、ＬｓＭＩＴ及ＬｓＵＢＬ采用实时定量ＰＣＲ的方法对ＬｓＮＡＤＰ、ＬｓＭＩＴ及ＬｓＵＢＩ基因表达进行相对定量，结果发现带毒灰飞風唾液腺和全身中这３个基因的表达均显著上调。与不带毒灰飞相比，带毒灰飞鼠唾液腺中ＬｓＮＡＤＰ基因、ＬｓＭＩＴ基因及ＬｓＵＢＩ的相对表达量分别提高了１７．４％、１２３．６％和６２．２％。ＬｓＮＡＤＰ、ＬｓＭ

7、ＩＴ和ＬｓＵＢＩ基因在带ＲＳＶ灰飞風虫体中的相对表达量较无毒灰飞風分别提高了２５．０％、４３．４％和１６．７％。－－巧采用ＲＮＡｉ研究了ａ亚基ＡＴＰ合酶（ＬｓＡＴＰ）、线粒体内膜移位酶基因（ＬｓＭＩＴ）、￣－〇１２（ＬｓＴＵＢ）对灰飞武传播ＲＳＶ的影响。ｄｓＲＮＡ的微管蛋白取食了含人工饲料后，灰飞風中ＬｓＡＴＰ、ＬｓＭＩＴ、ＬｓＴＵＢ的相对表达分别较对照下降了６３％、８２％、７６％，表明ＲＮＡ干扰效果明显。吸食了ｄｓＡＴＰ和ｄｓＭ打后，灰飞風的传毒与对照并无差异，未发现技两个基因

8、对灰飞風传毒有明显影响。取食含ｄｓＴＵＢ人工饲料的带毒灰飞風的传毒率为１２％，仅为取食纯人工饲料的对照的３０％。表明ＬｓＴＵＢ在介体传播民ＳＶ中具重要作用。ＬｓＴＵＢ一协助ＲＳＶ克服介体唾液朦屏障的机制侍进步详细的研究。关链词：灰飞或唾液腺；ＲＳＶ；差异蛋白；基因克隆；实时定量ＰＣＲ；ＲＮＡｉ；传毒率？扬州乂学硕古学位论文ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈ