灰飞虱体内水稻条纹病毒的检测

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1、第35卷第5期植物保护学报Vo1．35No．52008年10月ACTAPHYTOPHYLACICASINICA0ct．2008灰飞虱体内水稻条纹病毒的检测张开玉熊如意周益军(1．南京农业大学植物保护学院，南京210095；2．江苏省农业科学院植物保护研究所，南京210014)摘要：为评价灰飞虱体内水稻条纹病毒检测方法的适用范围，利用已经制备的水稻条纹病毒(Ricest却evirus，RSV)的多克隆抗体SV21和单克隆抗体3B9，采用多孔板间接ELISA、DIBA和Westernblotting等三种方法进行单头灰飞虱Laodelphax

2、striatellusFallen(SBPH)体内RSV检测。结果表明，检测灵敏度以多孔板间接ELISA最高，其次为DIBA，Westernblotting最低；用单克隆抗体3B9检测灵敏度高于多克隆抗体SV21。RT—PCR、IC．RT—PCR和DB—RT．PCR三种方法中，RT．PCR对单头灰飞虱稀释到400倍可检测到病毒；IC．RT—PCR在多克隆抗体SV21稀释浓度大于500倍时检测不出RSV，单克隆抗体3B9稀释浓度大于800倍时检测不到RSV；DB—RT．PCR检测结果显示，单头灰飞虱在稀释400倍后均无阳性反应。关键词：灰飞

3、虱；水稻条纹病毒；免疫检测；RT—PCR检测DetectionofRicestripevirusinLaodelphaxstriatellusFallenZhangKaiyuXiongRuyiZhouYijun-(1．CollegeofPlantProtection，NanjingAgricuhuralUniversity，Naming210095，JiangsuProvince，China；2．InstituteofPlantProtection，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，Naming21

4、0014，JiangsuProvince，China)Abstract：InordertoestimateserviceablerangeofthedetectionmethodsofRicestripevirus(RSV)insmallbrownplanthopper，LaodelphaxstriatellusFallen(SBPH)，polyclonalantibodySV21andmono—clonalantibody3B9againstRSVwereused．RSVinasingleSBPHcouldbedetectedwitht

5、heELISA，DIBAandWesternblottingmethodssuccessfully．Themonoclonalantibody3B9wasmoresensitivethanpolyclonalantibodySV21andpolywell-plateindirect·-ELISAwithpolyclonalantibodyormonoclonalanti·-bodyastestingantibodyhadahigherspecificityandsensitivitythanDIBAandWesternblotting．A

6、mongthethreemoleculardetectionmethods，RSVcouldbedetectedwith1：400dilutionofextractionofasin—gleSBPHusingRT—PCR，however，RSVcouldnotbedetectedusingIC·RT—PCRifthedilutionofpoly—clonalantibodySV21waslessthan1：500orthedilutionofmonoclonalantibody3B9waslessthan1：800．Theresultso

7、fDB．RT—PCRshowedthatRSVcouldnotbedetectedwith1essthan1：400dilutionofasinglemaleorfemaleSBPH．Keywords：Laodelphaxstriatellus；Ricestripevirus；immune—detection；RT-PCRassay水稻条纹病毒(Ricestripevirus，RSV)是纤细病成严重损失。近年来，该病毒在苏、鲁、豫、沪、浙等毒属Tenuivirus的典型成员，该病毒引起的水稻条纹地严重发生，21304年仅江苏省就有数万公顷

8、稻田因此叶枯病分布于我国十六个省市，给我国水稻生产造病而绝收[。RsV通过灰飞虱以持久方式传播，基金项目：江苏省重大科技攻关项目(BE2005301)，国家支撑计划(2006BAD02AI6、