植物组织培养实训指导书.doc

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1、植物组织培养实训指导书实训一植物组织培养室参观与设计一、目的要求通过参观，使学生掌握如何纽•建植物纽•织培养实验室；同时，熟悉纽培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。二、仪器与用具1、仪器：超净工作台，空调机，蒸懈水发生器或纯水发生器，高压灭菌锅，低温冰箱、普通冰箱,电炉，显微镜，天平、恒温培养箱，烘箱等设备。2、用具：各种培养皿，分注器，各种实验器皿和各种器械用具。三、方法步骤1、先由指导老师集中介绍组织培养实验室守则及有关注懑申项。2、先山指导老师讲解本次实验的目的、仪器设备和器皿用具的名称及实验步骤。3、指导老师逐一讲解组培实验室的构建情况，包括准备室（又称化学实验室）、缓冲室、无

2、菌操作室、培养室、驯化室、温室等使用的各种仪器设备和器皿用具的名称用途。1）准备室（化学实验室）而积：20m2左右用途：器皿洗涤、培养基配置、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸饰水的制备以及进行生理、生化因素的分析，试管苗出瓶，淸洗及整理工作。耍求：明亮、通风设备：工作台，橱柜，水池，仪器，药品等2）缓冲室面积：约3-5m2左右用途：进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的工作服、拖鞋，戴上口罩。设备：1盏紫外灯，1个配电板，石英电力时控器等3）无菌操作室（无菌室,接种室）而积:10-20m2，视生产规模和超净工作台数量而定。用途：材料的灭菌接种，无菌材料的继代，丛生菌的增殖或切割

3、，嫩枝抒插生根等，是关键的部分，关系到培养物的污染率、接种工作效率等重耍指标。耍求：干爽安静、清洁明亮、墙壁光滑平整不易积染灰尘,地面平坦无缝便于清洗和灭菌。门窗要密闭，一般用移动门窗。设备：超净工作台、空调机，医用小平车，操作台、搁架等。4）培养室而积：视培养架多少及培养物数量而定。用途：将接种到培养瓶等器皿中的梢.物材料进行培养的场所。设备：①培养架与灯光培养架数目多少视生产规模而定，年产4力_10力苗需4—6个培养架；年产10力一20力苗约需8—10个培养架。每个培养架一般6层，总高度2m,每0.3m为一层，最下一层距离地面0.2m架宽以0.6m为好，架长以40W日光灯的长度來

4、决定，即约1.26m。每层架子安装2盏口光灯。②通风设备在稍高处设置进风气窗，在其对侧近天花板处设置排风窗。③边台、空调机、加湿器（除湿器）、各类显微镜、温湿度汁。5）驯化室面积：视生产规模而定。用途：组培苗（试管苗）移栽询进行炼苗。要求：清洁无菌设备：空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器。6）温室血•积：视生产规模定。用途：保证试管苗不分季节地常年生产。设备：温度控制装置、通风口、喷雾装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具及相应药物。实训二植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。2、掌握纽.织培养室的消毒及灭菌方法。

5、3、拿握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。2、药品：2%新洁尔灭，高镒酸钾，卬醛，70%酒精。三、方法步骤（-）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的火菌：川2%新洁尔灭喷雾。（1）配方：収新洁尔灭原液20ml,加水980ml,配成2%新洁尔灭溶液。（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。（3）注意事项：%1墙壁、角落、地而喷雾要均匀，不要遗漏；%1注懣安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高镒酸钾熏蒸，1年中熏蒸1・2次。（1）配方：每立方米空间用甲醛

6、10ml加高镒酸钾5g的配比液熏蒸。（2）方法：首先房子要密封。然后在房子中间放一口缸或人烧杯，将称好的高猛酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。（3）注意事项:%1操作前要戴好口罩及手套；%1倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到窩镒酸钾会迅速沸腾，并产生大鼠烟雾。操作时人要迅速避开烟雾;%13天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。4、用紫外灯照射20—30min。5、使用前，再用70%酒蒂喷雾，使空间灰尘落下。（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤

7、：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。自然晾T•或烘箱T•燥。（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金屈器械分别包扎好。（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水耍淹没电热幺纟）。（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装熬憎水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器HII.和金属器械等。（5）灭菌：将排气阀开着，加热，直至锅内释放出人量水熬气（此时水蒸气横向喷出），再关闭阀们；或者当锅内压力升至49