09植物组织培养实训指导

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1、实训一MS固体培养基的配制、灭菌及保存一、实训目的掌握MS固体培养基的配制方法。二、设备仪器电子分析天平、托盘天平、灭菌器、电炉等。以下按小组为单位，烧杯、棕色细口瓶（1000ml1个、500ml1个、100ml1个）、量筒100ml1个、移液管0.1、0.5、2、10ml各1支、吸气球1个、定容瓶1000ml1支、小烧杯1支、培养瓶及瓶盖10个、精密pH试纸等。二、药品试剂MS培养基所需各种物质（见配方），琼脂，蔗糖（或绵口糖），0」MNaOH溶液，0.1MHCI溶液。lmol/LNaOH的配制方法是称4gNaOH,溶解后加入蒸谓水，定容到100ml即可。lmolHC1的配制方法

2、是量取,12molHC18.4ml,加水定容至100ml。四、母液的配制1.人聚元素母液在分析天平上按下表分别称取人蜃元素药品，置于三角瓶屮，分别加蒸帑水100ml左右于三角瓶中，再放到磁力搅拌器（或电炉）搅拌溶解，然后一-•倒入1000ml的容最瓶屮（注意CaC12要后加，最后加蒸憎水定容至刻度，此为10倍液的人最元素母液）。2.微量元素母液在分析天平上按表分别称取微量元素药晶，按大量元素母液配制方法,配成100倍液的微量元素母液。3.铁盐母液在分析天平上按表称取FcSO4.7H2O和Na2-EDTA药品，配成100倍液的铁盐母液。4.有机物母液：用分析天平按表分別称取U•氨酸、

3、VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成100倍有机物质母液。表1MS培养基母液的配制母液名称药品名称原配方量（mg）扩大倍数称取量（mg）母液体积（ml）移取量（ml）大量兀素母液NH4NO3165010165001000100KNO319001019000MgSO4-7H2O370103700KH2PO4170101700CaCl-2H2O440104400微量元素母液MnSO牛H2O22.31002230100010ZnSO4-7H2O&6100860CoCl-6H2O0.0251002.5CuSO4-5H2O0.0251002.5H3BO36.2100620Na2MCH2H2O0

4、.2510025KI0.8310083铁盐母液Na2-EDTA37.3100932.525010FcSO4-7H2O27.8100695有机物母液盐酸毗哆醇0.510025500最筒定容10盐酸硫胺索0.11005肌醇1001005000廿氨酸2100100烟酸(Vpp)0.510025实验三还需要NAA和6-BA,请准备！！!五、MS培养基的合成1.加热溶解先在1L的烧杯中加500ml蒸馆水，然后加入琼脂丝8g,加热并不断搅拌，直至琼脂完全溶化，透澈见底为止；再放入蔗糖22g,容解后，用量筒取大量元索母液100ml、用专用的移液管分别移取微量元素母液10ml，铁盐母液10ml，有

5、机物母液10ml入烧杯中。2.定容各种物质完全溶解，充分混合均匀后，加蒸憎水定容至1000mlo3.调整pH值用0.1N的NaOH或0.1NHC1调整pH值为6.0。六、培养基的分装搅拌均匀后，分装到培养瓶屮，每瓶约25-30ml,即1升培养基分装20・30瓶，最后封口，写上标号。七、培养基灭菌按灭菌器使用方法对培养基灭菌，将下次实训中耍使用的接种工具、器血、水、物品等—•起进行灭菌），高压保持20分钟。灭完后取出培养基等物站放在平台上冷凝。八、实训报告1.写出高压灭菌方法及注意事项。2.MS固体培养基的配制过程。实训二外植体的选择与消毒、接种一、实训目的通过实践熟练掌握茎段、叶片

6、作为外植体的选材，消毒，接种等技能。二、实训时期春、秋两季均町三、实训材料植物材料：红叶石楠嫩茎、叶片。仪器与用具：超净工作台、光照培养架、烧杯、纱布、玻棒、培养皿、剪刀、银子、酒精灯、记号笔。试剂药品：75%酒精、0.1%升汞、洗衣粉、甲醛、高铤酸钾、灭菌水、灭菌棉球、灭菌滤纸等。四、实训内容外植体的选取、消毒和接种五、实训步骤1.外植体选取、消毒和接种（1）选取无病无虫害健康幼嫩枝条，剪成3・4cm的大茎段（30个），剪去叶片，只留叶柄，流水冲洗干净，在超净台上用75%酒精浸泡半分钟，用无菌水冲洗1—2次；再用0.1%升汞浸泡5・8分钟，最后用无菌水冲洗次，无菌滤纸吸干备用。（

7、2）将剪下的幼嫩叶片按（1）中的方法进行清洗和消毒灭菌。2.接种过程（培养基配制略）（1）操作规程：接种前4h接种室灭菌-接种前20min打开紫外灯-接种员洗手，在缓冲间换鞋、穿好实验服-关紫外灯，开日光灯及风机，擦双手及台而一＞擦拭接种工具并反复灼烧，烘烤培养皿。（2）在无菌条件下（酒精灯火焰10cm范围内），将红叶石楠枝条切成含一个茎节的小段，茎节上留1/3茎节长，节下留2/3茎节长。每培养瓶接入1・2枚茎段。接种完，清理台面并标识。（3）在无菌条件下,将红叶石楠