黄芩MYB2、MYB7、MYB8基因在烟草中的功能验证及WRKY基因的克隆.pdf

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2、教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人或集体巧已巧文中作了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律责任和法律后果由本人承担。论文作者签名：句末４句签字曰期：州月文曰Ｓ年论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解武汉轻工大学有关保留、使用学位论文的规定，特授权栽汉控工大学可レッ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或其他复制手段钻存、汇编，＾处供查阅巧借關。同意学校向国家有关部口或机构送交论文的复本和电子文件。（保密的学位论文巧解密后适用本授权说明）论文作者莖名：导师签

3、名Ｃ签字日期：Ｍ年台月又日签字日期：夫一年月＾日（分类号密级公开UDC学校代码10496硕士学位论文黄芩MYB2、MYB7、MYB8基因在烟草中的功能验证及WRKY基因的克隆ThefunctionanalysisofMYB2、MYB7、MYB8geneandthecloneofWRKYgeneinScutellariabaicalensis论文作者齐琳洁指导教师陈平教授学科专业生药学论文提交日期20150611论文答辩日期20150601答辩委员会主席刘小平评阅人2015年6月I摘要非生物胁迫会严重影响植物的生长发育和产量，并且同时引发一系列的生态、生理、生化和

4、分子等方面的变化。植物经常面对的非生物胁迫包括：高盐、干旱、极端温度和外源激素等，而MYB转录因子在非生物胁迫中有着非常重要的作用，为了研究黄芩中的MYB2，MYB7、MYB8等转录因子如何响应非生物胁迫，本文在已有工作的基础上，对过表达SbMYB2，SbMYB7、SbMYB8转基因烟草进行三种胁迫处理（NaCl，甘露醇，ABA)，并通过对苯丙烷类类成分，生长状态，氧自由基清除酶系统相关酶活性及类黄酮合成途径相关基因等进行分析，其重要研究成果如下：（1）与野生型烟草WT相比较，转SbMYB2基因烟草中的芦丁含量显著升高，转SbMYB7基因烟草中的Kaempferol3-r

5、utinoside-7-glucoside显著升高；除此之外，转SbMYB2、SbMYB7基因烟草中的绿原酸含量也比较高，而WT中却未检测出。转SbMYB8基因烟草中的caffeoylquinicaciddimer和caffeoylquinicacid含量显著高于WT烟草和转空载基因的烟草。说明SbMYB2、SbMYB7、SbMYB8三个基因可能参与到了黄酮类化合物的代谢途径中。（2）为了鉴定SbMYB2、SbMYB7以及SbMYB8基因在非生物胁迫中的功能，分别在烟草中过量表达了SbMYB2、SbMYB7以及SbMYB8。结果表明转基因烟草的根长、鲜重及抗氧化酶活性都显

6、著性升高，表明其能够增强抵抗干旱、高盐、外源激素的能力。（3）转SbMYB2、SbMYB7、SbMYB8基因烟草在逆境胁迫下能快速诱导黄酮类化合物代谢途径相关基因的表达，增加其抗逆能力。（4）SbMYB8基因能够与SbCHS基因启动子中的GmMYB92BS3元件相结合。（5）从黄芩转录组数据库中共获得了33个SbWRKY转录因子，并对其核酸序列及编码蛋白特性、系统进化树等做了分析。（6）GA3处理黄芩后，SbWRKY1、SbWRKY2、SbWRKY6、SbWRKY10、SbWRKY11、SbWRKY12、SbWRKY13、SbWRKY15、SbWRKY17、SbWRKY1

7、8、IIISbWRKY19、SbWRKY20、SbWRKY21、SbWRKY22、SbWRKY25、SbWRKY28、SbWRKY29、SbWRKY30、SbWRKY32、SbWRKY33表达水平在GA3处理后均显著性下降，而SbWRKY16在处理后的第1、2h表达水平都显著性上升，SbWRKY24、SbWRKY27在处理后的1h表达水平显著上升，表明它们可能响应GA3信号，对下游基因进行调节。选取其中与黄酮代谢途径相关基因表达关系最为密切的SbWRKY33进行后续分析。（7）亚细胞定位结果表明SbWRKY33位于细胞核中，与