杨树npr1基因的克隆及功能验证

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1、安徽农业大学硕士学位论文杨树NPR1基因的克隆及功能验证姓名：邵元华申请学位级别：硕士专业：园林植物与观赏园艺指导教师：项艳201205摘要杨树作为林业生产巾的模式植物，因其生长速度快、适应性强和丰产等特性在世界各地广泛种植。然而，杨树病害多样，传统的抗病措施存在局限性，抗病机制的研究及分子育种具有很大的发展前景。系统获得性抗性(科stenlicacqu№dresis切nce，SAR)是一种植物主动防御机制，由局部感染引起的天然免疫反应，可保护植物体免受细菌、真菌及病毒的侵染，具有广谱抗病性。朋啵J基因是植物sAR信号途径中重要的调节因子

2、，在水杨酸或病原体激发下可诱导艘基因。过量表达NPRl类基因可有效增加植物自身的抗性。本文利用生物信息学的方法，根据杨树基因组数据分析了M哏J『基因的特点，在此基础上克隆和确定了南林95杨中的M唿J同源基因，构建其系统进化树，利用多重序列比对分析锚蛋白重复和BTB／POZ构域的分布，同时开展了AM强J．，亚细胞定位研究。构建pBll21+PtNPRl．2过量表达载体，对杨树进行遗传转化，并对转化植株进行了抗生素筛选和PCR鉴定。获得了如下主要结果：(1)克隆得到杨树两个M唿J的同源基因P删凇J．j(JQ231218)和P舯RJ．2(腰73

3、2893)。(2)AM飧J『．J和AM飧J．2相应的蛋白序列和进化关系分析表明其与拟南芥朋唿J基因结构及功能上高度的同源性。(3)构建了PINPRl．1．GFP融合表达载体，转化拟南芥原生质体表明P删豫J『．J『的亚细胞定位在细胞质中。(4)AⅣPRJ．J和P蹦PRJ．2的组织特异性和诱导表达分析表明杨树朋唿』基因没有组织特异性并且受外源SA的诱导。(5)克隆了AM豫J．J和AM飧J『．2的启动子，并进行分析表明含有与SA信号途径相关的顺式反应元件＆W1A叮和W

4、-boxes。(6)构建表达载体pBIl21+PtNPRl．2，采用农杆菌介

5、导的叶盘法对南林95杨进行遗传转化，经抗生素筛选获得2株转基因植株。关键词：杨树，NPRl，启动子，亚细胞定位，遗传转化AbstractAstllemodelplantinforcstproduct，poplariswidelycllltiVatedinthewoddbecauseofllighra：teof伊啉他，s呐ngadaptabil蛔andllighyield．However，也ereareVari01lspoplarmse嬲esand位ldjtionzLlresistantme邪uresareimperf-eCt．Resear

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