兽医免疫学-实验二 沉淀反应.ppt

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1、实验二沉淀反应一、环状沉淀反应二、双向琼脂扩散试验原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如果二者相应，则可在抗原、抗体两液接触界面形成白色的沉淀环。目的：以炭疽环状沉淀反应为例，掌握沉淀反应原理、操作方法及结果的判定方法。一、环状沉淀反应1．被检抗原（沉淀原）的制备：（1）热浸法取可疑材料约1克，研碎，加入5-10mL生理盐水混合，转至试管内，煮沸30min，取出冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。（2）冷浸法取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭菌后，取1cm2或兽毛数克浸于5-10倍的0.5%石炭酸生理盐水中，4℃浸渍18-24

2、小时，同上法过滤。一、环状沉淀反应实验材料：2．炭疽标准抗原3、炭疽阴性抗原（健康组织浸出液）4．阳性、阴性炭疽沉淀素血清5．毛细吸管沉淀反应管（Φ0.3-0.4cm）一、环状沉淀反应实验步骤用毛细吸管吸取炭疽沉淀素，插入沉淀反应管底部，缓慢注入到距管底的1/3处。用另一支毛细吸管吸取被检材料，插入离沉淀管底近1/3处，沿管壁缓慢加入到沉淀素的上面，边注边提使达到2/3高度处即可。静置5－10min结果观察设阳性、阴性对照一、环状沉淀反应试验组阳性对照组阴性对照组一、环状沉淀反应结果判定：两液面交界处出现清晰、致密如线的白轮

3、，是炭疽阳性。无此现象为炭疽阴性。一、环状沉淀反应二、双向琼脂扩散试验目的：掌握双向琼脂扩散试验的原理、操作方法及结果判定方法。原理：可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而对其它的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种AgAb系统的沉淀物。二、双向琼脂扩散试验ABBA抗体中针对B抗原的抗体可以跨越透过C抗原ABC1、鸡传染性法氏囊病

4、毒标准抗原；2、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清；3、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清；4、平皿（Φ6cm）、打孔器、微量加样器等；实验材料：二、双向琼脂扩散试验5、琼脂凝胶板：将琼脂糖1.0克、NaCl8.0克、蒸馏水100ml装入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取7ml加入平皿内（勿有气泡）使成约3mm厚的凝胶，待冷却凝固后按如下图方式打孔。注意:孔间距为孔的直径大小,打孔完毕要封底）二、双向琼脂扩散试验实验步骤：中间孔加标准抗原，外周孔加被检血清及阳性血清（如要测被检血清的效价，外周孔可倍比稀释后依次加入）。加样后盖上皿盖，3

5、7℃扩散24小时，观察结果。二、双向琼脂扩散试验Ab生理盐水Ag?一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。抗体过剩：前带现象；抗原过剩：后带现象。带现象（zonephenomenon）阳性：标准对照孔之间有明显的沉淀线时，受检孔与中央孔之间形成沉淀线并与阳性对照沉淀线融合。阴性：受检孔与中央孔之间无沉淀线。结果判断：二、双向琼脂扩散试验作业：完成实验报告，画出你所观察到的沉淀线，并对其进行简要说明。