临床检验免疫学 沉淀反应、凝集反应

《临床检验免疫学 沉淀反应、凝集反应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、沉淀反应、凝集反应阎祖炜湘雅医学院医学检验系第一节沉淀反应沉淀反应（precipitation）是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现的沉淀现象,其特性与经典的抗原抗体反应相同。第一阶段沉淀反应分两个阶段抗原抗体特异性结合，快速但不可见。免疫比浊法中的速率法就是利用此阶段测定免疫复合物形成的速率。第二阶段形成肉眼可见的大的免疫复合物。沉淀线或沉淀环的观察以及免疫比浊法中的终点法就是测定此阶段形成的复合物液体内沉淀试验凝胶内沉淀试验凝胶免疫电泳技术沉淀反应分类免疫浊度测定絮状沉淀试验单向扩散试验双向扩散试验对流免疫电泳火箭免疫电泳免疫电

2、泳免疫固定电泳环状沉淀试验又称环状试验。在小口径试管中先加入已知抗血清，然后将待检抗原小心地加在血清的表面，成为界面清晰的两层。数分钟后，两界面交界处出现白色沉淀环，为阳性反应。液体内沉淀反应一.环状沉淀试验常用做抗原定性，如炭疽的诊断（Ascoli氏试验）、鉴别血迹、媒介昆虫的嗜血性等。将抗原与相应抗体混合，在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状沉淀物。方法受抗原抗体比例的影响非常明显应用于测定抗原抗体反应的最适比例(三种类型)二、絮状沉淀试验抗原稀释法：抗原最适比例抗体稀释法：抗体最适比例方阵滴定法：抗原抗体最适比例絮状沉淀试验最适比

3、方阵测定法抗体稀释度抗原稀释度1/101/201/401/801/1601/3201/640对照1/5＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋±－1/10＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－1/20＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－1/40－±＋＋＋＋＋＋＋＋＋－1/80－－－－＋＋＋－可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。凝胶内沉淀反应一、免疫扩散试验是指可溶性抗原、抗体在含有相应电解质的凝胶内自由扩散，二者相遇而发生特异性结合，在比例适当处出现可见的沉淀

4、。抗体+琼脂沉淀环抗原倾注平板打孔加样放置37℃观察沉淀环（一）单向扩散试验（平板法）Mancini曲线：K＝C∕d2大分子抗原（IgM）时间扩散＞48h，普通坐标纸曲线单向扩散试验（平板法）T1为16～24h；T2为24～48h；T3为48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物线Mancini曲线Fahey曲线：K＝logC∕d小分子抗原（IgG,IgA）扩散时间24h半对数坐标纸曲线t1为16～24h；t2为24～48h；t3为48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线Fahey曲线单向扩散试验（平板法）方法学评价单向琼脂免疫扩散法操作简便，特异性强

5、，结果可靠，重复性好，敏感度稍差（不能测μg/ml以下含量）。注意：1）抗血清不但要求亲和力强、特异性好、效价高，而且还应注意存放的方法，防止效价下降；2）标准曲线测定必须同时制作，决不可一次做成，长期应用；3）有时出现双环现象，这是由于出现了不同扩散率、但抗原性相同的两个组分。例如α重链病；4）在免疫球蛋白的测定中，有时出现结果与真实含量不符，这是由于抗体相对过剩，使沉淀环直径变小；5）抗原相对过剩时，会使沉淀环呈不相关的扩大，从而造成某一成分的假性增加。6）测定时必须同时加测质控血清，以保证测量准确性。原理：将抗原抗体分别加在琼脂糖不同的对应孔中，

6、两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一二、双向扩散试验（平板法）双向扩散试验应用（平板法）1.抗原抗体存在与否以及相对含量的估计2.抗原抗体相对分子量的估计3.抗原性质的分析双向扩散试验应用（平板法）4.抗体效价的滴定5.抗原或抗体纯度的鉴定双向扩散试验应用（平板法）免疫电泳技术优点：1.加快反应的速度。2.提高了灵敏度。3.增加了分辨率。电泳分析＋沉淀反应抗原抗体反应的高度特异性电泳技术的高分辨率、快速、微量免疫电泳技术原理：双向扩散+电泳比双向扩散试验灵敏度提高8∼16倍技术要点：制备1.2%巴比妥

7、琼脂凝胶板，在其上成对打孔，孔径3mm，孔距6mm，于阴极侧孔内加待测血清，阳性侧孔加抗血清，电泳条件3～4mA/cm，30min～1h。一、对流免疫电泳通电－蛋白质抗原常带较强的负电荷，在电场中向正极移动抗体球蛋白带负电荷较少，籍电渗作用向负极泳动＋对流免疫电泳结果分析：无沉淀线出现则表明无相应的抗原。沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。对流免疫电泳电泳时凝胶中抗体不移动，样品孔中的抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的

8、沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗原量呈正相