沉淀反应与凝集反应-yhl

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1、第十章沉淀反应与凝集反应第一部分凝集反应第二部分　沉淀反应第一部分凝集反应第一节凝集反应的特点第二节直接凝集反应第三节间接凝集反应第四节自身红细胞凝集试验第五节抗球蛋白试验一、凝集反应定义细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。参与凝集反应的抗体有IgM和IgG,IgM的凝集作用比IgG大数百倍。第一节凝集反应的特点二、反应阶段抗原抗体的特异性结合出现肉眼可见的凝集现象三、特点该方法简便、敏感度高，应用广泛。四、类型按抗原的性质和反应方式的不同分为

2、：直接凝集和间接凝集直接凝集反应(directagglutination)：颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。第二节直接凝集反应（一）玻片凝集试验（二）试管凝集试验+（一）玻片凝集试验方法评价:定性试验，简便和快速；敏感度低。临床应用:菌种鉴定；血清学分型；血型鉴定。在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。（二）试管凝集试验方法评价：半定量试验；简便、快速；敏感度低；可有假阳性。应用：测定相应抗体的效价；可作临床诊断或流行病学调查。试管凝集试验根据凝集程度记录为：＋＋＋＋（100％凝集）、＋＋＋（75％凝集）、＋＋

3、（50％凝集）、＋（25％凝集）。以出现50％凝集以上的血清最大稀释度为该血清的凝集效价。间接凝集反应(indirectagglutination):将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。第三节间接凝集反应1.正向间接凝集试验2.反向间接凝集试验3.间接凝集抑制试验4.协同凝集试验一、间接凝集反应的类型用抗原致敏载体--检测抗体1.正向间接凝集试验2.反向间接凝集试验用抗体致敏载体----检测抗原3.间接凝集抑制试验用抗原致敏载体--检测抗原4.协同凝集试验协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体既非天然

4、的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种金黄色葡萄球菌。它的菌体细胞壁中含有A蛋白SPA具有与IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。协同凝集反应也适用于细菌的直接检测。二、间接血凝试验1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5121/1024Pos.Neg.Titer648512<232128324Patient12345678反向间接血凝试验血凝试验强度三、胶乳凝集试验孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不能消耗掉抗

5、HCG抗体。将待检血清或抗原和致敏乳胶各滴一滴在玻片上，阳性者5～10min即出现凝集。如妊娠免疫诊：四、明胶凝集试验将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集。五、间接凝集反应的应用一）抗原的检测反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。二）抗体的检测检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。未经致敏的受检者新鲜红细胞试剂：抗人O型红细胞的单克隆抗体临床应用：HIV检测、HBV检测第四节自身红细胞凝集试验自身红细胞凝集试验抗球蛋白试验又称Coombs试验第五节抗球蛋白试验（一

6、）直接Coombs试验检测红细胞上抗体或不完全抗体单价抗体只能与一方抗原的抗原决定簇结合，不产生凝集反应，当加入抗球蛋白抗体后，可以将两个各连接一方抗原决定簇的单价抗体连接起来，出现凝集现象。（二）间接Coombs试验检测血清中的抗红细胞抗体临床应用：在输血上的应用；血型抗原抗体的检查；对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断；对溶血性贫血的研究；对细菌或立克次体的不完全抗体检查。第一节沉淀反应的特点第二节　液体内沉淀试验第三节　凝胶内沉淀试验第四节免疫电泳技术第二部分沉淀反应1.沉淀反应（precipitation）:是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现的沉淀现象,其特性与

7、经典的抗原抗体反应相同。第一节沉淀反应原理及特点2.沉淀反应分两个阶段第一阶段：抗原抗体特异性结合，快速但不可见。第二阶段：形成肉眼可见的大的免疫复合物。免疫浊度测定絮状沉淀试验单向扩散试验双向扩散试验对流免疫电泳火箭免疫电泳免疫电泳免疫固定电泳①液体内沉淀试验②凝胶内沉淀试验③凝胶免疫电泳技术3.沉淀反应的类型絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合，在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状沉淀物。方法受抗原抗体比例的影响非常明显应用于