抑制自噬在视网膜光感受器细胞光损伤中的保护作用.pdf

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1、o"-C-<-a-5":二。一二—抑制自噬在视网膜光感受器细胞光损伤中的保护作用作者姓名：张天资专业名称：眼科学研究方向：视网膜光损伤的机制研究指导教师：苏冠方教授学位类别：医学博士培养单位：吉林大学第二医院论文答辩日期：二年（月日授予学位日期：年月曰论文评阅人答辩委员会组成姓名职称工作单位姓名职称工作单位原慧萍教授哈尔滨医科大学主席原慧萍教授哈尔滨医科大学附属第二医院附属第二医院吴仓怡教授山东大学齐鲁医院委员张晓梅教授哈尔滨医科大学附属第一医院陈晓隆教授中国医科大学苏冠方教授吉林大学第二医院刘平教授哈

2、尔滨医科大学吴雅臻教授吉林大学第二医院房学迅教授吉林大学生命科学院郑雅娟教授吉林大学第二医院未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的知道下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或机体已经

3、发表或撰写过的作品成果，对本文的研究作出重要的个人和集体，均在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名日期：年广月日刖过强的光或长时间直视光源会对视网膜造成的一定程度的损害，称为视网膜光损伤。不同波长的光对视网膜组织的损伤机制不同，主要有热损伤、机械损伤和光化学损伤，其中光化学损伤是最常见的类型。特别随着手机、电脑等电子产品的广泛普及和眼科光学诊疗器械应用日渐增多，各种光源所致的视网膜损伤问题愈发引起人们的注意。此外，视网膜光损伤的病理过程与年龄相关性黄斑变性、视网

4、膜色素变性等难治性眼底疾病有许多相似之处，视网膜光损伤会造成感光细胞的损伤、凋亡、生物膜溶解和细胞坏死，引发眼病，甚至导致视力丧失。目前对视网膜光损伤机制的探讨尚有待于进一步深入，而且至今尚无有效的治疗方法。自噬是真核细胞生物一种保守的降解并回收胞质内蛋白质或受损细胞器的过程，自噬与凋亡相互作用，共同完成细胞程序性死亡的进程。自噬是否可以引起视网膜感光细胞的光损伤，其作用机制和途径如何，是本实验研究的着眼点。细胞是光感受器细胞很好的替代细胞，我们以细胞为实验模型，研究发现：可见光照射可以诱导细胞发生自噬

5、现象，而抑制自噬可以有效地保护细胞免受损害，信号途径的活化是光致细胞死亡的关键。这些研究结论使我们对于视网膜光损伤相关疾病中感光细胞死亡的分子机制有了更为清晰的认识，为进一步寻求一种理想的治疗方法提供了新的思路。中文摘要抑制自噬在视网膜光感受器细胞光损伤中的保护作用自噬是一种保守的细胞自我退化的过程，在细胞生长关键时期如发育阶段或营养缺乏时常常对细胞发挥保护作用。然而，有时自噬也参与细胞凋亡进程。光感受器细胞是唯一直接暴露在光照下将光刺激转换为视觉信号的神经元细胞。但过强的光照射对视网膜仍具有细胞毒性作

6、用。至今为止，视网膜光损伤的确切机制尚不明确，并且临床上仍无有效治疗方案，特别是自噬在光诱导感光细胞凋亡中的作用机制有待进一步探讨。光照对诱导细胞产生自噬的作用目的：通过不同的自噬检测方法，观察可见光照射对细胞自噬的影响。方法：（利用可见光处理传代培养后的细胞株，建立光感受器细胞光损伤模型。利用检测分析自噬标志性蛋白在细胞中的表达水平，以及利用电子显微镜对自噬体形态学变化进行观察。（应用和两种不同的自噬抑制剂对细胞进行预处理后，通过染色进行细胞死亡百分比定量评估，观察抑制自噬对细胞光损伤保护作用的影响。

7、结果：在光强度照射的细胞中表达水平明显增强，实验组细胞中的比例明显高于对照组细胞，其差异有统计学意义。经过天光照后，细胞表现出典型的自噬特性，一些胞内物质如细胞器被包绕在双层膜囊内，成为自噬小体。（应用的光照前分钟对细胞进行预处理，细胞死亡比例从下降至其最佳浓度在左右；细胞与的预孵化，细胞死亡率从减少至，在显示出最好的保护作用。其差异有统计学意义。结论：光照是诱导细胞发生自噬的关键，而且阻断自噬可以有效地保护感光细胞免受损害。信号途径对光诱导细胞自噬的影响目的：研究在可见光照射条件下，信号途径对细胞活性

8、的影响，探讨自噬在光诱导感光细胞凋亡中的作用机制。方法：（利用可见光处理传代培养后的细胞株，建立光感受器细胞光损伤模型。（利用检测磷酸化，磷酸化，磷酸化的表达水平，通过染色对抑制剂，抑制剂和抑制剂预处理后的细胞进行细胞死亡百分比定量评估。（在指定时间内收集细胞裂解，利用检测和磷酸化后和表达水平的变化，以及通过染色观察自噬小体内溶酶体生成情况。结果：（收集细胞裂解，对磷酸化，磷酸化，磷酸化的表达水平进行蛋白免疫印迹分析，实验组（磷酸化组）扫描