小胶质细胞失稳态在光损伤视网膜变性中的作用研究

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1、万方数据复旦大学博士学位论文小胶质细胞失稳态在光损伤视网膜变性中的作用研究Thestudyontheroleofactivatedretinalmicrogliainlight—inducedphotoreceptordegeneration院系：眼耳鼻喉科医院专业：眼科学博士生：张萌导师：徐格致教授导师组成员：吴继红副研究员倪颖勤博士2013年4月万方数据复旦大学博士学位论文目录

2、JIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII—Y2702434中英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第一部分Fractalkine／CX3CRl在光损伤大鼠模型中的表达时空变化规律及与小胶质细胞和神经元关系的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、16实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37第二部分Fractalkine／CX3CRl对体外共培养体系光感受器损伤和小胶质细胞激活之间分子对话作用的研究全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6l参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63附录一综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68附录二研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯80致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯83知钔躬钞钞～料法果～～材方结～言验验验论前实实实讨万方数据复旦大学博士学位论文中英文缩略语Age—relatedmaculardegeneration，AMDRetinitispigmentosa,RPHematoxylinandeosin，HEPolymerasechainreaction，PCRTumornecrosisfactor一Ⅱ．TNF．QInterleukin一1B．IL一113Enzyme-linkedimmuno

6、sorbentassay，ELISA年龄相关性黄斑变性视网膜色素变性苏木精伊红染色聚合酶链反应肿瘤坏死因子a白介素113酶联免疫吸附测定法万方数据复旦大学博士学位论文小胶质细胞失稳态在光损伤视网膜变性中的作用研究中文摘要以年龄相关性黄斑变性(age—relatedmaculardegeneration，AMD)、原发性视网膜色素变性(retinitispigmentosa,RP)等为代表的外层视网膜变性性疾病是目前世界范围内主要的致盲眼病之一，其共同的病理改变为光感受器细胞不可逆性的凋亡。此类疾病的分子病理机制

7、及治疗是目前研究的难点。近年来小胶质细胞的作用逐渐受到重视。光感受器损伤后激活小胶质细胞，导致进一步神经元损伤已得到证实。但光感受器损伤和小胶质细胞激活之间的分子对话机制仍不清楚，阻止该过程成为从同一途径延缓视网膜变性发展的关键。研究提示趋化因子Fractalkine可能是二者功能对话的重要介质。本研究采用光损伤视网膜模型、体外光感受器和小胶质细胞共培养模式，研究Fractalkine及受体CX3CRl信号在光感受器损伤后的时空变化，着力于分析该信号的变化规律及与视网膜小胶质细胞激活、神经元凋亡之间潜在的关系，

8、并深入探讨其调控小胶质细胞激活的细胞内信号途径，阐明神经元损伤和小胶质细胞激活之间的分子机制，为延缓视网膜变性疾病的进展开拓新治疗思路。第一部分Fractalkine／CX3CRl在光损伤大鼠模型中的表达时空变化规律及与小胶质细胞和神经元关系的研究目的：探讨Fractalkine及其受体CX3CRl在光损伤大鼠模型中的表达时空变化规律，并着重分析比较其时空变化与神经元凋亡及小胶质细胞迁移活化之间的可能关系。方法：将SD大鼠置于光损伤箱中接受24h强度为25001ux的宽谱蓝光照射，制成I型光损伤动物模型，选取光

9、损伤后的2h、6h、1d、3d、5d、7d为观察检测时间点。采用HE(hematoxylinandeosin)染色观察不同时间节点光损伤大鼠外核层的厚度及感光细胞数目变化情况。采用免疫组化荧光观察视网膜病变不同阶段小胶质细胞的活化迁移及Fractalkine／CX3CRl的表达部位及表达量的变化，用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测视网膜光感受器凋亡情况，利用Westernblot